Bio Technical フォーラム

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non-RI系EMSAのバッファーについて トピック削除
No.3889-TOPIC - 2015/02/24 (火) 11:09:31 - ^^
こんにちは

non-RI系のEMSAを行う予定です
ビオチン修飾したプローブをStreptavidin-HRPを用いて化学発光検出しようと考えているのですが、
いくつか質問させてください

1. 転写させたナイロン膜のブロッキングおよび洗浄にはどのようなバッファーを使えばよろしいのでしょうか?
ウェスタンブロッティングのようにTBS+tweenで可能なのでしょうか?

2. ブロッキングに用いるブロッキング剤のおすすめはありますでしょうか?
当研究室にはスキムミルクとBSAがあり、どちらを使用するか迷っています

宜しくお願いします
 
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(無題) 削除/引用
No.3889-3 - 2015/02/24 (火) 11:46:04 - おお
スキムミルクはビオチンが含まれているので不適当ではとかこうとしてた。

(無題) 削除/引用
No.3889-2 - 2015/02/24 (火) 11:37:43 - AP
スキムミルクはビオチンが含まれているので不適当では。
わたしは、DIG systemでやったことしかなくて、Rocheのblocking reagent(ミルクカゼイン精製物)をつかっていましたが。DIGだと洗浄バッファーはマレイン酸ベースですが、これはおそらくblocking reagentとの相性の問題で、それが問題にならない場面ではTrisでokで、TBSTwでいいと思います。その他、Rocheなどのキットの説明書を参考にしたらいいと思います。

non-RI系EMSAのバッファーについて 削除/引用
No.3889-1 - 2015/02/24 (火) 11:09:31 - ^^
こんにちは

non-RI系のEMSAを行う予定です
ビオチン修飾したプローブをStreptavidin-HRPを用いて化学発光検出しようと考えているのですが、
いくつか質問させてください

1. 転写させたナイロン膜のブロッキングおよび洗浄にはどのようなバッファーを使えばよろしいのでしょうか?
ウェスタンブロッティングのようにTBS+tweenで可能なのでしょうか?

2. ブロッキングに用いるブロッキング剤のおすすめはありますでしょうか?
当研究室にはスキムミルクとBSAがあり、どちらを使用するか迷っています

宜しくお願いします

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