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BSA-peptideの透析　ELISA固相化 トピック削除
No.3864-TOPIC - 2015/02/17 (火) 19:43:13 - あかね
peptideをBSAにコンジュゲートしてELISAアッセイ用の抗原として使おうと思っています。
コンジュゲートするbufferは10 mM phosphate buffer, 100 mM EDTA, 80 mM EDTAです。
ELISA assayの際に、peptide-BSAをプレートに固相化するのですが、sucroseやEDTAは固相化の効率に影響しますか？

BSA-peptideを透析すべきか迷っています。
サンプル数が多いので、できれば透析せずに、コンジュゲーション反応産物を直接ELISAアッセイに使いたいのですが、、、
　
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(無題) 削除/引用
No.3864-4 - 2015/02/18 (水) 19:14:36 - あかね
皆さん、コメントありがとうございます〜。

(無題) 削除/引用
No.3864-3 - 2015/02/18 (水) 10:45:49 - mon
まあ、問題ないでしょう。
固相化表面の違い等でもしかしたら差はあるかもしれませんが。
やはり確認するのが安心です。ペプチドに対する抗体があるなら通常のELISAで比較しても良いですし、または（思いつきですので保証できませんが）
BSAをPBSまたはコンジュゲートbufferに溶かし、ELISA plateのwellに入れ、PBSでwashし、クーマジー染色液等で染色＞PBSでwash、でBSAの固相量を見積もってみてはいかがでしょうか。他の方法でも良いと思います。

(無題) 削除/引用
No.3864-2 - 2015/02/18 (水) 09:51:45 - qw
ペプチド(1-10ug/ml PBS)のままでOKな場合が多いと思います。
タンパクを固相化する条件と変わりありません。

BSA-peptideの透析　ELISA固相化 削除/引用
No.3864-1 - 2015/02/17 (火) 19:43:13 - あかね
peptideをBSAにコンジュゲートしてELISAアッセイ用の抗原として使おうと思っています。
コンジュゲートするbufferは10 mM phosphate buffer, 100 mM EDTA, 80 mM EDTAです。
ELISA assayの際に、peptide-BSAをプレートに固相化するのですが、sucroseやEDTAは固相化の効率に影響しますか？

BSA-peptideを透析すべきか迷っています。
サンプル数が多いので、できれば透析せずに、コンジュゲーション反応産物を直接ELISAアッセイに使いたいのですが、、、
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