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(無題) 削除/引用 No.3863-2 - 2015/02/18 (水) 08:13:58 - mon 成書や抗体受託会社の免疫スケジュールが参考になると思います。 長く免疫しても成功率は上がらない＝抗原がもったいないと思います。 抗体価が低い（と思った）ときは、再度免疫してELISAで前回採取血清と同時に比較して抗体価が上がらなければ免疫は十分と言うことです。まあ、標準スケジュールから追加3回免疫が諦めの限界かな。 1000倍で吸光度が0.5程度といっても反応時間や条件しだいで色は濃くなるで、希釈系列での比較に意味があるのですが、非免疫ラットではほぼ０ということなので、免疫応答はあると言うことです。 また、スクリーニングの方法もしっかり計画してください。でないと沢山のクローンを前に途方に暮れます。最終目的にそったスクリーニングが重要です。 WBに使えなくても免染には使える、その逆もあります。両方に使えるとありがたいですけど。 低分子抗原（ハプテン）だと、免疫に用いた特定の固相法だけ結合するのだと、使用法が限られます。 余力があるならリンカーや支持体が異なるものを用意すると良いでしょう。 特異性の検討方法もよく考えてください。 Good luck!

ポリクローナル抗体力価から融合の判断 削除/引用 No.3863-1 - 2015/02/17 (火) 19:09:30 - 初心者 皆様 ラットへ抗原を免疫し、モノクローナル抗体の作製を試みていますが、初心者のため、ご意見頂ければと思います。工学系に所属しているため、アドバイスをもらえる人が周囲にいないためこちらで質問している次第です。 ラットへ複数回、腹腔へ抗原を投与し、尻尾から採血して血清を採取してELISA法にてポリクローナル抗体があるか検討しました（血清の希釈を１００、１０００、１００００倍）。 その結果、１０００倍で吸光度が0.5程度、１００００倍で0.2程度、ネガティブコントロールの免疫をしていないラット血清では何れも吸光度はほぼゼロでした。 今後も継続的に免疫操作を実施するか、或はこのままミエローマ細胞と融合してモノクローナル抗体取得を試みるか判断に困っています。 こういった作業は初めてのため、皆様のご意見頂ければ幸いです。 抗原によって数値に乖離があるのは承知ですが。

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