Bio Technical フォーラム

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抗ヒトIgG抗体の認識部位 トピック削除
No.3823-TOPIC - 2015/02/07 (土) 08:56:39 - なる
いつも参考にさせていただいております。
先日、抗ヒトIgGラット抗体(モノクローナル)を購入したのですが、その抗体がヒトIgGのどこを認識しているのか知りたく色々調べています。
データシートには、抗原はホールのヒトIgGとあり、メーカーにと問い合わせると、「解析していないけど多分Fc領域」という回答がありました。

Fcを認識ているのか、それともそれ以外なのかを解析するのに以下のことを考えているのですが、いかがでしょうか。

◎ヒトIgGを血しょうから分離し、酵素(パパイン等)で切断してFcを精製後にウエスタンブロットを行う。

◎ヒト血しょうをそのままサンプルにしてウエスタンブロットを行う。


上記以外で手法がありましたらご教授願います。
 
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(無題) 削除/引用
No.3823-5 - 2015/02/08 (日) 08:39:11 - なる
おおさま

コメント有難うございます。
SDSで反応しなくなってしまう可能性がありますので、
まずはELISA等で検討してみます。

(無題) 削除/引用
No.3823-4 - 2015/02/07 (土) 11:21:28 - おお
2次抗体使うなら吸収などされた抗体でも大なり小なりクロスリアクトすることもありますから、そのためのコントロールもとった方がいいでしょう。

(無題) 削除/引用
No.3823-3 - 2015/02/07 (土) 10:36:33 - おお
きになるのはWBにてきした抗体でしょうか?

(無題) 削除/引用
No.3823-2 - 2015/02/07 (土) 09:53:05 - おお
>◎ヒトIgGを血しょうから分離し、酵素(パパイン等)で切断してFcを精製後にウエスタンブロットを行う。


ヒト血しょうをそのままサンプルにしてウエスタンブロットを行ってもよいでしょうけど、上記でIgGを分離してるんだったら、消化する前のものを同時に流したらいいのでは?ポジこんになりますし。

抗ヒトIgG抗体の認識部位 削除/引用
No.3823-1 - 2015/02/07 (土) 08:56:39 - なる
いつも参考にさせていただいております。
先日、抗ヒトIgGラット抗体(モノクローナル)を購入したのですが、その抗体がヒトIgGのどこを認識しているのか知りたく色々調べています。
データシートには、抗原はホールのヒトIgGとあり、メーカーにと問い合わせると、「解析していないけど多分Fc領域」という回答がありました。

Fcを認識ているのか、それともそれ以外なのかを解析するのに以下のことを考えているのですが、いかがでしょうか。

◎ヒトIgGを血しょうから分離し、酵素(パパイン等)で切断してFcを精製後にウエスタンブロットを行う。

◎ヒト血しょうをそのままサンプルにしてウエスタンブロットを行う。


上記以外で手法がありましたらご教授願います。

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