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(無題) 削除/引用 No.3812-4 - 2015/02/03 (火) 14:27:35 - おお ちなみにmitochondriaのDNAごうせいをとめてrespiration-defectiveのじょうたいでもひと、まうすのさいぼうはcultureできます。 ごめんなさい、いまかんじへんかんができません。

(無題) 削除/引用 No.3812-3 - 2015/02/03 (火) 13:51:32 - ~ >これが生細胞数と比例するということは、ミトコンドリア(またはミトコンドリア内の脱水素酵素)は生細胞特有であるという理解でよいのでしょうか？ 全酵素が失活するまで細胞は生きているのだと考える人は少ないでしょうから、 死んでいる細胞でも、酵素が分解・失活するまでの間は活性は残るでしょう。 また、生きている細胞でも状態によって活性が変わることもあるでしょう。 >MTT試薬を選ぶ際は、できるだけ細胞毒性の低い試薬を用いる方が良いですよね？ そうですね。 ただ、測定後の細胞を継続して使用することはないでしょうから、 測定さえできるのであれば、他に優先すべき項目が多いと思いますが。 >これはよい、といったキットなどはあるでしょうか？ XTTとWST8を使ったことがありますが、 どちらも溶解ステップが不要なので便利でした。 >これも脱水素酵素と記載があるので、ミトコンドリア内で反応が起こるということでしょうか？ ttp://www.dojindo.co.jp/technical/pdf/catalog-project.pdf MTTとは違う酵素活性を見ているようですね。

WB re-probing 削除/引用 No.3812-2 - 2015/02/03 (火) 13:12:20 - おお >[Re:1] mmさんは書きました : > しかし、MTT法は細胞中のミトコンドリアに含まれる脱水素酵素により、試薬中のMTTが青色色素（ホルマザン）に還元されるという原理ですよね。 > これが生細胞数と比例するということは、ミトコンドリア(またはミトコンドリア内の脱水素酵素)は生細胞特有であるという理解でよいのでしょうか？ 比例するとはかぎりません。なので厳密にいうとあなたの実験系で比例するか予備実験が必要です。

MTT法 削除/引用 No.3812-1 - 2015/02/03 (火) 11:57:19 - mm 細胞毒性試験を行っています。 簡便なMTT法で行おうと考えてます。 しかし、MTT法は細胞中のミトコンドリアに含まれる脱水素酵素により、試薬中のMTTが青色色素（ホルマザン）に還元されるという原理ですよね。 これが生細胞数と比例するということは、ミトコンドリア(またはミトコンドリア内の脱水素酵素)は生細胞特有であるという理解でよいのでしょうか？ また、MTT試薬を選ぶ際は、できるだけ細胞毒性の低い試薬を用いる方が良いですよね？ これはよい、といったキットなどはあるでしょうか？ また、検索している時に、WST1、WST8を用いたキットもみつかりました。 水溶性のホルマザンが生成されるため、ホルマザンの溶解工程が必要ないらしいですが。 原理は、細胞中の脱水素酵素により産生されるNADHによりWSTをホルマザンに還元するようです。 これも脱水素酵素と記載があるので、ミトコンドリア内で反応が起こるということでしょうか？

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