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FITC-dextran uptake と Total RNA抽出を同時に トピック削除
No.3810-TOPIC - 2015/02/03 (火) 05:33:14 - kuwanaaman

質問は、RNAを抽出(Qiagen RNeasy)する際、FITC-dextranの取り込みはRNA抽出の収量や質に影響しうるのかどうか、です。

表題の通り、培養細胞を用いて時系列的にFITC-dextran uptakeの解析と、同じサンプルからのRNAを用いてRT-PCRを考えています。

ある処理を行いながらのuptakeと遺伝子発現の変化を同時に追いたいと考えています。
FITC-dextran添加、無添加で同時に細胞を準備しそれぞれuptake用、RT-PCR用とすれば良いのかもしれませんが、同じサンプルから情報を得た方がベターかと考えています。


もし、どなたかご経験がある方がいらっしゃれば、ご教授願います。

よろしくお願いいたします。
 
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No.3810-6 - 2015/02/04 (水) 01:32:53 - kuwanaaman
アドバイスのように植物用のキットなら確かに多糖も除けますね。
的確なコメントどうもありがとうございます。
非常に参考になりました。

試していきたいと思います。
どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.3810-5 - 2015/02/03 (火) 09:28:41 - TS
動物組織で類似の実験をしたりしますが、vestさんがおっしゃるように影響ないと思います。
FDの使用量、ひいては取り込み量なんて、ごくごく微量ですよね。

(無題) 削除/引用
No.3810-4 - 2015/02/03 (火) 07:52:20 - vest
私はまさにそれを用いて検討しております。
比較したことはありませんので、感覚ですが・・・
純度に困ったことはありません。
260/280 = 2 前後です。
収量は一概に言えませんが、私の実験系では、十分量は取れる。
とだけにしておきます。

(無題) 削除/引用
No.3810-3 - 2015/02/03 (火) 07:35:34 - おお
あとそのきっとで肝臓などグリコーゲンなどの多糖がおおい組織でなにかsuggestionがあればそれを参考にしてもいいかもよ。

(無題) 削除/引用
No.3810-2 - 2015/02/03 (火) 07:33:44 - おお
多糖など除ける植物用などで使えるキットやプロとコールを使うと安心かもね。

FITC-dextran uptake と Total RNA抽出を同時に 削除/引用
No.3810-1 - 2015/02/03 (火) 05:33:14 - kuwanaaman

質問は、RNAを抽出(Qiagen RNeasy)する際、FITC-dextranの取り込みはRNA抽出の収量や質に影響しうるのかどうか、です。

表題の通り、培養細胞を用いて時系列的にFITC-dextran uptakeの解析と、同じサンプルからのRNAを用いてRT-PCRを考えています。

ある処理を行いながらのuptakeと遺伝子発現の変化を同時に追いたいと考えています。
FITC-dextran添加、無添加で同時に細胞を準備しそれぞれuptake用、RT-PCR用とすれば良いのかもしれませんが、同じサンプルから情報を得た方がベターかと考えています。


もし、どなたかご経験がある方がいらっしゃれば、ご教授願います。

よろしくお願いいたします。

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