Bio Technical フォーラム

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DAPIでDNAを染め体積を定量する トピック削除
No.3808-TOPIC - 2015/02/02 (月) 18:26:31 - ダッピー
こんばんは。
いつも勉強させていただいております。
当方、M1の学生でマウス受精卵の勉強をしています。
マウス胚の核の体積を測りたいのですが、共焦点顕微鏡でZ stackで3D写真を撮りimage Jで画像処理する事で可能だという事を耳にしました。しかし、調べてもちんぷんかんぷんで近くに詳しい先輩もおらず、手間取っています。
何かいい方法があれば教えていただけませんでしょうか?

今現在は、ZEISSの顕微鏡で撮影してます。
 
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(無題) 削除/引用
No.3808-8 - 2015/02/12 (木) 21:47:16 - ダッピー
toyoさんの方法で試してみます。
皆さん貴重なご意見ありがとうございました。

Plugin 削除/引用
No.3808-7 - 2015/02/08 (日) 14:32:38 - fj
こちらで紹介されているpluginはどうでしょうか?
(上から三番目くらいの投稿にリンクがあります。)

http://imagej.1557.x6.nabble.com/Trying-to-measure-nuclear-volume-using-IMAGEJ-td3693666.html

(無題) 削除/引用
No.3808-6 - 2015/02/08 (日) 14:20:06 - おお
toyoさんが書いている原理ではかれるとおもいます。上からしたまでスキャンして、それぞれの面積を足していかないといけませんけどね。

imageJでそういうマトリックスを作っている人がもしかしたらいるかもしれません。

もし形が楕円ぽくって、ほぼ皆同じような形をしているなら、長径と短径などから近似が可能かもしれませんが、これはある程度近似値が信用できることを言わないといけないかもしれません。

ところでDAPIってDNAを染めているわけで核が染まっているわけではないので、どうなんでしょうかね、、、うまく体積がはかれますでしょうかねぇ。。。

核膜を染めるものなら核の形を反映すると思いますが。。。

(無題) 削除/引用
No.3808-5 - 2015/02/06 (金) 18:57:45 - ダッピー
皆さんご意見ありがとうございます。

>toyoさん
現在は、卵をtritonでつぶす事で扁平ににして、面積と輝度によりDNA量を量っていましたので、次のサンプルからはつぶさずにそちらの方法を試してみたいと思います。
貴重なご意見ありがとうございました。

>おおさん
自分もそのような方法でできると思っていたのですが、業者に聞いた所、有料なソフトウェアが必要だと言う回答と、もしかしたらimage Jでできるのでは?という回答を得たので、このような形で質問させていただいていました。
回答ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.3808-4 - 2015/02/03 (火) 00:25:42 - おお
よくわからんのだけど、3D構築してから体積ははかれんかな。。。。

(無題) 削除/引用
No.3808-3 - 2015/02/02 (月) 18:57:58 - toyo
胚の体積を知りたいのか、核の体積を知りたいのか、文面からではよくわかりませんでしたが、とりあえず核の体積だとすると、

体積 = 面積 × 高さ

なので、各z-stackごとに核を検出して、「それぞれの核の面積*スライスの厚み」のz方向の和を取れば核の体積が得られるでしょう。

核の検出について、具体的には
(1)画像を開き、Image->Type->8-bit
(2)Image->adjust->Threshold
(3)Set->OK
(4)Analyze->Set MeasurementsでLimit toThresoldとAreaにチェック
(5)Analyze->Analyze Particles
などとすればよいでしょう。

DAPIでDNAを染め体積を定量する 削除/引用
No.3808-1 - 2015/02/02 (月) 18:26:31 - ダッピー
こんばんは。
いつも勉強させていただいております。
当方、M1の学生でマウス受精卵の勉強をしています。
マウス胚の核の体積を測りたいのですが、共焦点顕微鏡でZ stackで3D写真を撮りimage Jで画像処理する事で可能だという事を耳にしました。しかし、調べてもちんぷんかんぷんで近くに詳しい先輩もおらず、手間取っています。
何かいい方法があれば教えていただけませんでしょうか?

今現在は、ZEISSの顕微鏡で撮影してます。

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