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Non-RIノーザンブロット法の検出方法 トピック削除
No.3797-TOPIC - 2015/01/29 (木) 20:24:23 - Norさん
いつも勉強させていただいています。
Non-RIノーザンブロット法を導入しようと考えています。
うちの研究室にはウエスタンブロット法で使っている
冷却CCDカメラのイメージャーがあるのですが検出できるか気になります。
もちろん、発現レベル・装置に依存するとは思いますが、
皆さんの検出方法はどのようなものでしょうか。

また、G○ヘル○ケアのミニカメラを使用されたことのある方、
使用感はいかがなものでしょうか?

どうぞよろしくお願いいたします。
 
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No.3797-8 - 2015/01/30 (金) 12:05:07 - Norさん
AP様、AA様、おお様、皆様のおかげで焼けぼっくいに火がついてしまいました。
という冗談はさておき、うちのイメージャーと同じ機械でやったという論文を見つけましたので導入する方向に舵を切りたいと思います。

皆様の御助言ありがとうございました。

以上でこのトピックを閉じさせていただこうと思います。

(無題) 削除/引用
No.3797-7 - 2015/01/30 (金) 11:12:19 - おお
mRNAの検出ならpolyA精製して流すと感度が稼げるかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.3797-6 - 2015/01/30 (金) 10:50:11 - AA
DIG標識プローブとAP標識DIG抗体、発酵器室にRocheのCSPDを用いて、
BioradのChemidocで撮影していました。
特に問題なく撮影できていたので、結局mRNAの量によるのだと思います。

(無題) 削除/引用
No.3797-5 - 2015/01/30 (金) 10:06:34 - AP
>うちの研究室のは2時間までしか撮影できないので厳しそうですね。
大部分はそれくらいあれば検出できると思います。ターゲットの発現量によるでしょう。

(無題) 削除/引用
No.3797-4 - 2015/01/30 (金) 09:05:30 - Norさん
AP様、おお様、情報ありがとうございます。

うちの研究室のは2時間までしか撮影できないので厳しそうですね。
ミニカメラもデータで出せない程度ですか。

RIを継続するのがよさそうですね。

(無題) 削除/引用
No.3797-3 - 2015/01/30 (金) 01:08:11 - おお
G○ヘル○ケアのミニカメラってポラロイドのやつに直接コンタクトしてってやつかな、、、シグナルはみれるけどデーターにはできないぐらいの像が得られるってきくけど、、、

(無題) 削除/引用
No.3797-2 - 2015/01/29 (木) 20:33:19 - AP
CDP-starなどAlk phosphataseでの検出でしたら、長時間露光に対応している機種でなら可能だと思います。
だいたいHRP/ルミノール系で行われることの多いWesternの検出装置は、短時間の強い発光に合わせて設計されているので、比較的発光が弱いけれど長時間光り続けるAP/CDP-star系には向かないものもあります。オーバーナイトくらいの長時間露光ができるものが望ましいですね。ノーザンのシグナルがウェスタン並に強い場合はいいですけれどね。

Non-RIノーザンブロット法の検出方法 削除/引用
No.3797-1 - 2015/01/29 (木) 20:24:23 - Norさん
いつも勉強させていただいています。
Non-RIノーザンブロット法を導入しようと考えています。
うちの研究室にはウエスタンブロット法で使っている
冷却CCDカメラのイメージャーがあるのですが検出できるか気になります。
もちろん、発現レベル・装置に依存するとは思いますが、
皆さんの検出方法はどのようなものでしょうか。

また、G○ヘル○ケアのミニカメラを使用されたことのある方、
使用感はいかがなものでしょうか?

どうぞよろしくお願いいたします。

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