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(無題) 削除/引用 No.3787-3 - 2015/01/28 (水) 02:46:30 - 独り言 なんだかんだ言っても、EGFPで分泌顆粒をラベルしている論文はたくさんあるからそれに従うのがベターだと思う。実際にEGFPのpHと蛍光強度を調べたグラフをみればわかると思いますが、pHが低いと入ってもEGFPの蛍光が消失するほどではないし。EGFPでは質問者さんの系がワークしなかったのであれば、もちろん他の手を考えるしかないですが。 前例が少ないことをやるとトラブルの元となって、時間を浪費することになるようなきがする。

(無題) 削除/引用 No.3787-2 - 2015/01/28 (水) 02:11:28 - おお Environmental sensitivity When images must be quantitatively interpreted,it is critical that the fluorescence intensity of the protein used not be sensitive to factors other than those being studied. .... Most FPs also have some acid sensitivity. For general imaging experiments, all FPs listed in Table 1 have sufficient acid resistance to perform reliably. More acidsensitive FPs, however, may give poor results when targeted to acidic compartments such as the lumen of lysosomes or secretorygranules, and may confound quantitative image interpretation if a given stimulus or condition leads to altered intracellular pH.Because of this, one should avoid using mOrange4, GFPs or YFPsfor experimentsin which acid quenching could produce artifacts.Conversely, the pH sensitivity of these proteins can be very valuable to monitor organellarluminal pH or exocytosis. http://www.tsienlab.ucsd.edu/Publications/Shaner%202005%20Nature%20Methods%20-%20Choosing%20fluorescent%20proteins.pdf

分泌顆粒内タンパクの標識に適切なのはturbo GFP? mCherry？ 削除/引用 No.3787-1 - 2015/01/28 (水) 01:49:12 - ぽんすけ 大変お世話になっております。 もしご存知の方がいらっしゃれば教えていただきたいのですが、、 分泌顆粒内のタンパクを蛍光標識してフローサイトメトリーでソーティングしたいと考えております。 分泌顆粒内はpH5程度とそれなりの酸性です。 なるべく強く励起できるのもを探しています。 いま、turbo GFPやmCherryを考えているのですが、他に酸性環境に強く発色がよいものはありますでしょうか？ いろいろと試してみるつもりですが、他に有望なものがあればご教示ください。

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