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RFP発現までの経過時間について トピック削除
No.3785-TOPIC - 2015/01/27 (火) 06:33:01 - もりりん
lacIのプロモーターをもつRFPが入ったプラスミド(pSB1C3)をE.coliJM109
に形質転換した後、37℃インキュベーターで培養(培地はL-CmPlate)しました。
培養開始から12時間ではRFPの発現(赤いコロニー)は確認できず。
19時間後に確認をしました。
発現が通常よりも遅れたのにはどのような理由が考えられますか?

ひとつの仮説としてはCAPによるもの、12時間までは培地中のグルコースを消費し、19時間付近でAMPの濃度が高くなり、アクチベーターが結合することにより転写が促進された。

他にもどのような可能性があるのかご教授願います。
 
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(無題) 削除/引用
No.3785-3 - 2015/02/02 (月) 12:42:08 - ぺーぺー
発現と言う言葉を「細胞に遺伝子を入れて蛍光が観察できるまでのプロセス」と考えておられるんですから、一旦そのなかの部分的なプロセスを切り分けて考えることをお勧めします。

そのうえで、~様のおっしゃっているような項目を検討すればいいのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.3785-2 - 2015/01/27 (火) 10:08:51 - ~
>発現が通常よりも遅れたのにはどのような理由が考えられますか?
「通常」とはなんでしょうか?_
その「通常」との違いが原因と考えられるでしょう。

材料の違い
・菌株
・プラスミド
操作の違い
・形質転換法
・形質転換後の培養時間
・培地組成
・培地の厚さ(温度変化等に影響)
・温度
検出法の問題
・蛍光顕微鏡のランプの具合が悪かった
・蛍光顕微鏡の操作ミス

>ひとつの仮説としてはCAPによるもの、12時間までは培地中のグルコースを消費し、19時間付近でAMPの濃度が高くなり、アクチベーターが結合することにより転写が促進された。
これでは、なぜ、「通常」では12時間までに転写が促進されたのかを説明できていませんね。

RFP発現までの経過時間について 削除/引用
No.3785-1 - 2015/01/27 (火) 06:33:01 - もりりん
lacIのプロモーターをもつRFPが入ったプラスミド(pSB1C3)をE.coliJM109
に形質転換した後、37℃インキュベーターで培養(培地はL-CmPlate)しました。
培養開始から12時間ではRFPの発現(赤いコロニー)は確認できず。
19時間後に確認をしました。
発現が通常よりも遅れたのにはどのような理由が考えられますか?

ひとつの仮説としてはCAPによるもの、12時間までは培地中のグルコースを消費し、19時間付近でAMPの濃度が高くなり、アクチベーターが結合することにより転写が促進された。

他にもどのような可能性があるのかご教授願います。

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