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DTT/bMEを中和する方法 トピック削除
No.3758-TOPIC - 2015/01/20 (火) 02:26:54 - おお
cell lysatesをDTTやbMEの入ったバッファーで作り、それを後に不活化したいのですが、蛋白にあまり影響しないような方法はないでしょうかね。。。酸化剤を加えればいいのでしょうけど、H2O2なんかじゃまずいのは目に見えてるし。
 
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No.3758-5 - 2015/01/20 (火) 13:32:58 - おお
みなさん。ありがとうございます。確かに抜く方がシンプルですね。
皆さんのコメントをみながら調べていくと、ヨウ素くわえるだけでなんとかなりそうかなぁというきもしたりしましたが、やはりすっきりしませんね。

(無題) 削除/引用
No.3758-4 - 2015/01/20 (火) 10:12:08 - qw
中和するより、透析かG25でゲルろ過で除去の方が楽そう。

(無題) 削除/引用
No.3758-3 - 2015/01/20 (火) 09:54:50 - ~
こういう話は、何を壊すかよりも、何を残すかのほうが重要かと思います。

DTTはiodoacetoamideで不活性化できそうですね。
たんぱく質も無傷では済みませんが。
ttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2253190/
ttp://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2011/biotechforum.cgi?mode=view;Code=130

高分子たんぱく質がターゲットであれば、
UFでバッファーチェンジしてしまうのも手かと。

(無題) 削除/引用
No.3758-2 - 2015/01/20 (火) 09:45:48 - mbb
やったことはありませんが、フリーの
マレイミドと反応させてたら不活化
出来そうな気がします。

DTT/bMEを中和する方法 削除/引用
No.3758-1 - 2015/01/20 (火) 02:26:54 - おお
cell lysatesをDTTやbMEの入ったバッファーで作り、それを後に不活化したいのですが、蛋白にあまり影響しないような方法はないでしょうかね。。。酸化剤を加えればいいのでしょうけど、H2O2なんかじゃまずいのは目に見えてるし。

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