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(無題) 削除/引用 No.3709-3 - 2015/01/07 (水) 15:48:47 - おお まあ実際はCt値は2の乗数だから、linearな相対数に直してからの方が正確性があると思いますが。ようするに2^3と2^4と2^5の平均は2^4にはなりませんよね。

(無題) 削除/引用 No.3709-2 - 2015/01/07 (水) 15:34:13 - おお 健常人のdCtの平均と、患者のdCtの平均があれば両者の比較はできますけど、何を示したいかによっては、あなたのやり方もありかと思います。 >となりD、E、Fさんはターゲット遺伝子をそれぞれ健常と比較し2^-5.2、2^-3.2、2^-3.2倍発現しているということでよいでしょうか？ ことばのあやみたいなもんですが、D、E、Fさんはターゲット遺伝子をそれぞれ健常人平均と比較し...とかけばあなたの示している数値は言葉どおりとなりますよ。 >threshold lineの設定はautoでいいのか autoでなにかスタンダードになるものを同時に測り、ちゃんと定量できていればautoのままで何ら問題がないですし、測れてなくてthreshold lineの問題にしぼれるならスタンダードがきれいにのるようにthreshold lineをいじればいいのでは? 使っているマシーンのにつなげているソフトによってもautoといっても算出結果が変わってくるかもしれませんし、あまり具体的なことは参考にならないかもしれません。わたしはあまり細かい経験はありませんのでこれ以上はかけませんが、マシーン、ソフトなのど開示できれば具体的な情報を書き込む方がいらっしゃるかもしれません。

リアルタイムPCRの定量について 削除/引用 No.3709-1 - 2015/01/07 (水) 14:50:02 - KEI はじめまして。いつも参考にさせていただいています。 最近mRNAのリアルタイムPCRをはじめた者です。 定量の仕方がわからないのですが、例えば 健常３人、疾患３人でとある遺伝子の発現を確認したいときに GAPDHのCt値が健常[Aさん9,Bさん10,Cさん11]、疾患[Dさん10,Eさん11,Fさん12] ターゲットのCt値が健常[Aさん16,Bさん18,Cさん20]、疾患[Dさん17,Eさん16,Fさん17]だとします。 いわゆる２�刧僂t法で計算し健常群に対する疾患群の人のそれぞれの発現量を計算する場合、健常３人の平均を用いて計算すればよいのでしょうか？ �僂tDさん＝17-10＝7 �僂tEさん＝16-11＝5 �僂tFさん＝17-12＝5 �僂t健常＝(16+18+20)/3-(9+10+11)/3=1.8 �僂tDさん-�僂t健常＝7-1.8＝5.2 �僂tEさん-�僂t健常＝5-1.8＝3.2 �僂tFさん-�僂t健常＝5-1.8＝3.2 となりD、E、Fさんはターゲット遺伝子をそれぞれ健常と比較し2^-5.2、2^-3.2、2^-3.2倍発現しているということでよいでしょうか？ また、threshold lineの設定はautoでいいのか、0.2などの一定の値で行うべきかわかりません。 よろしくお願いいたします。

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