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血清飢餓条件の培地成分 トピック削除
No.3707-TOPIC - 2015/01/06 (火) 19:10:54 - DSC
既出でしたらすみません。
培養細胞に対する血清飢餓ストレスの影響を調べようとしています。
血清飢餓条件の培地は、単純に血清無添加の元の培地を使用すればよいのでしょうか?
それだと、コントロール(10%血清)と比較して血清以外のすべての培地成分の濃度が10/9倍になります。
血清の代わりにPBSか何かを加えるべきでしょうか?
同様な実験をされている皆様は、どのようにされていますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.3707-6 - 2015/01/08 (木) 10:59:11 - おお
培地には血清に入っている細胞を維持する最小限の成分が入っていると考えればいいでしょう。たとえばMEMなどのグルコースの濃度は血清中のその濃度とほぼ一緒です。high glucoseと過剰に入った培地でなければ。

(無題) 解決済み 削除/引用
No.3707-5 - 2015/01/08 (木) 10:28:09 - DSC
皆様ありがとうございます。

独り言様、おお様
基本的に培地成分自体の希釈は考慮しなくてよいということですね。
今回の場合は参照している論文に「no FBS」とありますので、
まずは血清なしと10%の条件で比較してみたいと思います。

mon様
厳密な実験条件の例をお示し頂き、ありがとうございます。
私は高分子(増殖因子etc.)の影響が大きいと勝手に思っていたので、
「やるとしたら限外濾過した血清の添加かなー」などと考えておりました。
単純な血清なしの条件以降、細かな条件検討が必要になったら参考にさせて頂きます。

(無題) 削除/引用
No.3707-4 - 2015/01/07 (水) 09:45:03 - mon
おおさん、独り言さんの通りですが、追加情報として、
血清中の低分子の影響をみるなら、透析血清や活性炭処理血清が昔によく用いられました。これらは今も市販されているようです。
ただ不明な成分が多いため、簡単に、0.1~1%血清+精製増殖因子も汎用されますし、もう少し厳密に、
亜セレン酸ナトリウム+トランスフェリン+BSA(脂肪酸が付いているもの、あるいは脂肪酸なし+精製脂肪酸)+精製増殖因子
を使って、個々の増殖因子の影響を検討することも行われます。
アポトーシスを防ぐため、IGF-1(または比較的高濃度のInsulin)も添加しておくこともあります。
全くの無血清だとアポトーシスが誘導される細胞も多いので注意してください。
0.5%くらいが多用されるかな。

(無題) 削除/引用
No.3707-3 - 2015/01/07 (水) 00:39:00 - おお
もとの培地に血清をいれないか、細胞維持のために0.1-1%ぐらいの血清をいれた培地をつかいます。培地は薄めません。

(無題) 削除/引用
No.3707-2 - 2015/01/06 (火) 19:37:59 - 独り言
厳密には言っていることは正しいと思いますが、血清飢餓は単純に血清をいれない培地を使用するだけが一般的だと思います。

血清飢餓条件の培地成分 削除/引用
No.3707-1 - 2015/01/06 (火) 19:10:54 - DSC
既出でしたらすみません。
培養細胞に対する血清飢餓ストレスの影響を調べようとしています。
血清飢餓条件の培地は、単純に血清無添加の元の培地を使用すればよいのでしょうか?
それだと、コントロール(10%血清)と比較して血清以外のすべての培地成分の濃度が10/9倍になります。
血清の代わりにPBSか何かを加えるべきでしょうか?
同様な実験をされている皆様は、どのようにされていますか?

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