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(無題) 削除/引用 No.3702-3 - 2015/01/06 (火) 17:36:51 - AP ハナハンの改良型、CCMB80バッファーというやつのようですね。 原法ではあらかじめpH 7に調整したKOAc溶液で加えて、さらに最後にHClでpHを下げるようですね。最終的に組成とpHがあっていたとしても、solidのKOAcで加えてあとからpHを合わせるのとでは別ものになっている可能性がありますね。個体のKOAcを水に溶かした直後はpH 10近くの塩基性になっていると思います。 Co++は塩基性では不溶性のCo(OH)2を形成してしまって、一旦そうなるとあとからpH 6.4くらいに下げても溶けないんじゃないでしょうか。 そのせいで、形質転換効率が低かったのかどうかはわかりませんけれど。 今更Hanahanの方法に固執することもないのでは？ 国産？のInoue方にしたら？　もっとシンプルだし、だれがやっても比較的コンスタントな効率が得られますよ。（Mnが析出しやすいけれど、Coみたいに厄介で他に使い道もないようなものは使わない）。

(無題) 削除/引用 No.3702-2 - 2015/01/06 (火) 16:30:51 - おお ttp://openwetware.org/wiki/TOP10_chemically_competent_cells

自作コンピテントセルのストック溶液について 削除/引用 No.3702-1 - 2015/01/06 (火) 16:08:12 - MY こんにちは。 自作コンピテントセルのストック溶液について教えてください。 今の研究室では、XL1-Blue を買ってきて、それをもとに大量に増やして自作のコンプテントセルをストックしています。 コンピテントセルのストック溶液が、 KCl 　　　3.73g MnCl2・4H2O 　　　　　 4.455g CaCl2・2H2O　　　　　　　　　0.75ｇ 塩化ヘキサアンミンコバルト　　0.4g 酢酸カリウム　　　　　　　　　0.5ｇ グリセロール　　　　　　　　　50ml 水で400ｍｌに溶かした後、pH6.4 に合わせてtotal 500ml にします。 この溶液を前任者の方が作ったものを使用していたときはコンピテントセルの調子は悪くなかったのですが、 今回、ストック溶液を作り直したら、ストックしたての時は順調にコロニーを形成してくれたのですが、時間が経ってから使うと、コロニーの数が少なくなりました。 ストック溶液に問題があるのかと思い、質問しました。 塩化ヘキサアンミンコバルトが非常に溶けづらく、フィルとレーションの時にフィルターが目詰まりを起こしたので、塩化ヘキサアンミンコバルトの濃度が低くなったのかな？とは思うのですが。 コンピテントセルを自作している方、どんな組成のストック溶液を使っていますか？ また、上記と同じようなストック溶液を使用している方がいらっしゃいましたら、ぜひご意見を伺わせてください。 よろしくお願いします。

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