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(無題) 削除/引用 No.3675-2 - 2014/12/17 (水) 20:18:06 - TK-1 シングルバンドで、バンド位置が違うのなら、ストリップしない、あるいはメンブレンをきって一回でやってしまう。 トランスファーやローディングがばらつくことがないとは言い切れないので、きっちりと見ないといけない場合は同じメンブレンでやる。 ただ、気をつけないといけないのは、違う細胞間でも比較や、何らかの刺激で活性化したりする場合には当然いわゆるハウスキーピングタンパクも変動することは大いにあるので、同量のタンパクをのせても必ずしもそろうことはない。それに、もう少し言うと、あるタンパクのレベルが低いとか高いとか言うのは、のせるタンパク量を基準にするより、同一細胞数あたりで見る方が生物学に意味がある場合がある。たとえば、別のアッセイ系ですが、flow cytometryなどは細胞あたりのタンパクレベルを検出できる系であり、個人的にはそちらの方が意味がある。その辺も考えてみても面白いと思う。

ウエスタンでのローディングコントロールの考え方 削除/引用 No.3675-1 - 2014/12/17 (水) 19:52:45 - 質問 いつも参考にさせていただいております。 ローディングコンロトロール、例えばβアクチン、GAPDH、チューブリンなどがありますが、これらのバンドはリプロービングで検出したものなのでしょうか？ といいますのも、まずウエスタンで見たいタンパクを検出してメンブランをストリップして再度、抗体をかけるとタンパク定量しているにも関わらず（正確にサンプル調製できているとして）リブロット像が各レーンで若干揃わないことがたまにあります。リブロットせずにダイレクトにローディングマーカーの発現を見ると綺麗に揃っています。 これはやはりストリッピングによって綺麗にタンパクが剥がれていないもしくは部分的にタンパクが剥がれすぎて若干のムラに繋がっているのでしょうか？ みなさんはローディングコントロールのデータを取る際、リブロットしているのか、見たいタンパクとは別のメンブランでバンドを検出しているのでしょうか？ またサイエンスとしてどちらが正しいのでしょうか？

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