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(無題) 削除/引用 No.3623-3 - 2014/12/04 (木) 07:29:10 - CST アポトーシスが進行中の細胞から、通常の核と細胞質のタンパク質をきちんと分画できるのであれば、二つの分画でのデータを別々に示せば良いように思います。核膜が壊れているアポトーシス細胞でPARP-1が細胞質分画に抽出された場合、それが元々細胞質に存在していたのか、あるいは、核に存在していたPARP-1がタンパク抽出の過程で細胞質分画に出てきてしまったのか、区別できますか？ 個人的には、アポトーシス細胞から、きちんと核タンパクを抽出できる自信がないので、PARP-1のcleavageをウエスタンで見る場合は、細胞を直接SDSサンプルバッファーに溶かして、whole cell lysateでやってます。

(無題) 削除/引用 No.3623-2 - 2014/12/03 (水) 11:33:13 - おお >[Re:1] ppppさんは書きました : > アポトーシス後期ならば核膜が壊れているところから細胞質中に出てきたりするのかなと思いました。 > ウェスタンブロットを行った結果が、核蛋白質と細胞質蛋白質で異なっていたので。 > どなたか詳しい方がいらっしゃいましたら、アドバイスお願い致します。 核蛋白質と細胞質蛋白質で異なって... とおっしゃいますがそんなのはどうでもよくて、どちらかにでも切れたものが検出されれば、アポトーシスの判定はポジといえるので、それでいいのではないでしょうか。だめなんですか?

アポトーシス関連（PARP)のウェスタンブロット 削除/引用 No.3623-1 - 2014/12/03 (水) 11:10:11 - pppp お世話になります。 アポトーシス関連の因子（cleaved caspase 3やPARPなど）を、現在ウェスタンブロットで解析しています。蛋白質が、違う実験に使う関係で、核と細胞質の抽出液を別に調製したのですが、cleaved PARPを検出するには、どちらが適しているでしょうか？ PARPならDNA修復因子ということで、核蛋白質で検出するところですが、今回はcleaved PARPです。 アポトーシス後期ならば核膜が壊れているところから細胞質中に出てきたりするのかなと思いました。 ウェスタンブロットを行った結果が、核蛋白質と細胞質蛋白質で異なっていたので。 どなたか詳しい方がいらっしゃいましたら、アドバイスお願い致します。

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