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(無題) 削除/引用 No.3595-5 - 2014/12/01 (月) 20:53:27 - 名無し モノクローナル抗体あるいはモノスペシフィクなポリクローナル抗体とかの場合、エピトープの領域にシステインがあると還元／非還元で認識が大きく影響を受ける可能性はあるとおもう。またシステインのSHはいろんなものと反応しうるので、変なものがくっついたままだと抗体が認識できないかもしれない。分子内のSS結合が切れないとエピトープにうまくアクセスできないという可能性もあるかもしれない。

(無題) 削除/引用 No.3595-4 - 2014/11/28 (金) 15:07:54 - gyan お忙しい中　皆様回答していただきありがとうございます。 今度、転写後のメンブレンを還元剤で処理してみます。 ありがとうございました。 また、抗体も変えて検討してみます。

(無題) 削除/引用 No.3595-3 - 2014/11/28 (金) 04:27:37 - おお 非還元状態でへてろな分子の集団になり分散されてしまい検出限界以下になることも想像できます。非還元状態でバンドがシャープにならなかったり、スメアになったりするのはよく見かけるような気がします。 あとは指摘がありますが抗原部位がかくれてしまったか。もしそうだとすると抗体を変えることで解決するかもしれません。使っている抗体を作ったときの抗原を確かめて、モノクロやペプチド抗体なら考えてみてもいいかもとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.3595-2 - 2014/11/27 (木) 18:43:03 - NR 抗体認識部位が非還元状態ではマスクされている可能性があると思います。泳動終了後のゲルか、転写後のメンブレンを還元剤で処理してウエスタンするとバンドが出るかもしれません。

ウエスタンブロットのバンド検出について 削除/引用 No.3595-1 - 2014/11/27 (木) 18:05:51 - gyan ウエスタンブロットを行ったのですが、還元条件ではバンドが検出されますが、非還元だとバンドが検出されませんでした。 何回もやったのですが結果は同じでした。非還元ではバンドは検出されにくいなんてことあるのでしょうか？

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