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(無題) 削除/引用 No.3592-4 - 2014/11/28 (金) 04:36:13 - おお 真核生物のゲノムからとって大腸菌でリコンビナントをつくるとか、マンマルやハエからとって、イーストなどでリコンビナントをつくるとかなら、まずだめでしょう。 大腸菌など原核生物からとって、大腸菌などで発現させるなら、できるかもしれないし、できないかもしれない。その場合はぽりしすとろにっくに発現するのか、どんな発現制御エレメントがあるのか、菌体間でそのエレメントがコンパチブルかなどしっているべきかとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.3592-3 - 2014/11/27 (木) 21:24:19 - 独り言 その方法だと後ろの遺伝子は内在性のプロモーターってことですよね。 普通、大腸菌でリコンビナント作るならプロモーターをT7とかIPTG誘導性にして、大量発現にしないと量的に精製しにくいんじゃないかな。

(無題) 削除/引用 No.3592-2 - 2014/11/27 (木) 11:54:29 - mon 文面から判断すると、A・Bは大腸菌などの原核生物の遺伝子でしょうか？ 原核生物の遺伝子なら、タンパクの翻訳開始のために、開始コドンの10bp(?)ほど上流にSD配列と呼ばれるリボソーム結合配列が必要です。 発現ベクターのクローニング部位上流にSD配列がないなら、開始コドンの15~20bpほど上流から組み込んだ方が良いでしょう。 また、発現ベクターのSD配列を利用する場合、A遺伝子の翻訳効率が変わり、B遺伝子産物とのタンパク量の差が出るかもしれません。もっとも余ったA遺伝子産物はホモ複合体を作らないなら、A/B複合体を作らず不安定で分解されるかもしれないので、問題にならないかもしれません。

リコンビナントタンパク質の作製 削除/引用 No.3592-1 - 2014/11/27 (木) 11:14:40 - リコンビナントタンパク質の作製 AとBの二つのタンパク質から成るリコンビナントタンパク質を作製したいと思っています。 二つのタンパク質はゲノム上で近接しており、A: 839-2014,　B: 2061-3203に位置しています。AとBの間には、47塩基（2061-2014）存在しています。 Aの開始コドン839とBの終始コドン3203を挟むようにプライマーを設計してPCRをし、発現ベクターに入れれば、AとBの二つのタンパク質から成るタンパク質はベクターから同時にできるのでしょうか？ ご教授いただけましたら、幸いです。 よろしくお願い致します。

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