Bio Technical フォーラム

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グラジエントPCRについて トピック削除
No.3579-TOPIC - 2014/11/23 (日) 16:23:33 -
いつもありがとうございます。
グラジエントPCRをかけようと思うのですが、プライマーのTm値を参考に、どれくらいの温度を中心にグラジエントをかければ良いのでしょうか?
お願いいたします。
 
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No.3579-5 - 2014/11/24 (月) 04:06:05 - おお
んそれともqPCR時の増幅効率とかも気にしないといけないのかな。。。

(無題) 削除/引用
No.3579-4 - 2014/11/24 (月) 03:20:01 - おお
マシンがどの様に設定できるかわかりませんけど、2度間隔ぐらいで12段階設定できれば、68から下げていって50度以下まで設定できますよね。0.5度間隔とか細かくとっても何処まで意味があるかとも思えますし、どんなもんでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.3579-3 - 2014/11/23 (日) 18:28:34 - ~
PCRの目的や、テンプレートやプライマーに癖がありそうかどうかなどで、
振り方はケースバイケースだと思いますが。

私なら、ややこしそうなPCRなら50~68℃くらい、
問題がなさそうなら低いほうのTm値-2±5℃くらいあたりに設定します。
さらに問題がなさそうなら、グラジエント機能のないサーマルサイクラーを使いますが。

(無題) 削除/引用
No.3579-2 - 2014/11/23 (日) 18:24:18 - おお
上はシャトルで68度というのがメジャーな設定値だと思うので68度あたりをMAXにして、下は適当でいいんじゃないか。50度ぐらいとか。。。

グラジエントPCRについて 削除/引用
No.3579-1 - 2014/11/23 (日) 16:23:33 -
いつもありがとうございます。
グラジエントPCRをかけようと思うのですが、プライマーのTm値を参考に、どれくらいの温度を中心にグラジエントをかければ良いのでしょうか?
お願いいたします。

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