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(無題) 削除/引用 No.3573-11 - 2014/12/01 (月) 15:20:21 - mon > LIC 用のプラスミドは、環状ではなく > 突出末端になっているのですよね。 おそらく環状でしょう。addgeneで増やして分譲していますし、切断状態とかの但し書きがなければ。 LIC用には自分で切断、それなりの末端処理（おそらく一種類のデオキシヌクレオチドのみを添加してT4DNA polymease処理かな？）してください、とのことでしょう。 方法は引用文献に記してあるでしょうから、ご確認ください。 無処理でそのままtransformationすればよいと思いますよ。

すいません 削除/引用 No.3573-10 - 2014/11/27 (木) 18:02:59 - ある男 mon様 コメントありがとうございます。 誤解があり申し訳ありません。 LIC 用のプラスミドは、環状ではなく 突出末端になっているのですよね。 このプラスミドを購入して pET ベクターとの共発現に使う場合 このthioredoxin 用のプラスミドを購入したとすると そのままトランスフォーメーションに使用できるのでしょうか。 それとも、LIC用のプラスミドは突出末端を埋めるような操作が 必要なのでしょうか。 お忙しいところ申し訳ありませんが ご教授いただけないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3573-9 - 2014/11/27 (木) 17:08:11 - mon > 紹介いただきましたプラスミドを用いる場合 > トランスフォーメーションは、二つのプラスミドで > 一緒に行い、2種類の抗生物質で選択すればよろしいのでしょうか。 はい。 > やはり直鎖にしないと、トランスフォーメーションは出来ないのでしょうか。 sacB， ccdB等の（条件）致死遺伝子が入っていなければ、環状ままで。 念のためチオレドキシン遺伝子のCDSをご確認ください。 なぜ「やはり」と思うのでしょうか？LICの原理を誤解していませんか？ 通常のplasmidは環状でないと複製できませんよ。

有難うございます 削除/引用 No.3573-8 - 2014/11/27 (木) 11:45:14 - ある男 皆様 ありがとうございます。 紹介いただきましたプラスミドを用いる場合 トランスフォーメーションは、二つのプラスミドで 一緒に行い、2種類の抗生物質で選択すればよろしいのでしょうか。 また、このベクターは LIC 用とのことですが、 やはり直鎖にしないと、トランスフォーメーションは出来ないのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3573-7 - 2014/11/24 (月) 04:10:54 - おお >[Re:6] monさんは書きました : > 配列まで見たわけではないけど、ColE1系orと共存できる13S CDF originって、下部に書いてあリますよ。 あ、かいてますね。マップにはoriが表示されてませんね。。。pETDuetからとったってかいてたような気がするので、pETのoriを使っているような気がしたんだけど、薬剤マーカーはampでないから、oriはちがうのかなぁ。。。なんか紛らわしいというか説明がきっちりかかれてませんね。わたしなら、問い合わせてみるでしょうね。。。

(無題) 削除/引用 No.3573-6 - 2014/11/23 (日) 06:15:12 - mon 配列まで見たわけではないけど、ColE1系orと共存できる13S CDF originって、下部に書いてあリますよ。

(無題) 削除/引用 No.3573-5 - 2014/11/23 (日) 06:03:34 - おお >[Re:4] しさんは書きました : > 昔やったことがあるけれども、耐性マーカーが違えばori同じでもなんとか・・・。 > 発現量は普段よりも幾分少ないなと思いましたが。 なるほど、耐性というレベルでは両方維持可能というはなしはちらほらききますが、できないことはないのですね。 均等に両方維持できるかという点で、違うプラスミドのペアーがおなじような割合でもてるかという点も気になるところです。

(無題) 削除/引用 No.3573-4 - 2014/11/23 (日) 05:48:28 - し 昔やったことがあるけれども、耐性マーカーが違えばori同じでもなんとか・・・。 発現量は普段よりも幾分少ないなと思いましたが。

(無題) 削除/引用 No.3573-3 - 2014/11/23 (日) 02:09:06 - おお >[Re:2] monさんは書きました : > http://www.addgene.org/48330/ > http://www.addgene.org/48322/ > が使えると思います。 pETではおなじoriで共発現はむずかしいのでは。。。

addgene 削除/引用 No.3573-2 - 2014/11/22 (土) 20:20:35 - mon http://www.addgene.org/48330/ http://www.addgene.org/48322/ が使えると思います。

共発現用Thioredoxin 発現プラスミド 削除/引用 No.3573-1 - 2014/11/20 (木) 10:24:57 - ある男 バカな質問で申し訳ありません。 pET ベクターと一緒に使えます 共発現用の Thioredoxin 発現ベクターはありますでしょうか。 DNAワークができない環境になってしまいましたので 市販で購入できる商品を探しております。 お忙しいところ大変申し訳ありませんが アドバイスいただけないでしょうか。

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