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核蛋白質のハウスキーピング トピック削除
No.3562-TOPIC - 2014/11/18 (火) 17:18:30 - au
ウェスタンブロットを計画しているのですが、核蛋白質のハウスキーピングとして、GAPDHは適当ですか?
また、他に推奨されるものはあるでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.3562-8 - 2014/11/19 (水) 19:09:11 - AP
核画分をとってそれをウェスタンブロットするというなら、核の純度がサンプル間で異なることが考えられるので、核タンパク質を内部標準に取るのが妥当でしょう。一方、総細胞抽出物を泳動サンプルとするなら内部標準は別に核タンパク質でなくてもいいはずですね。核タンパク質と細胞質タンパク質の抽出効率がサンプル間でブレる可能性のあるような特殊な抽出法を用いていない限り、

(無題) 削除/引用
No.3562-7 - 2014/11/19 (水) 00:20:51 - おお
ttp://www.labome.com/method/Loading-Controls-for-Western-Blots.html

nuclear proteins
lamin B166
TATA binding protein TBP38
PCNA29
histone H1
histone H3

You may chose one from above.

(無題) 削除/引用
No.3562-6 - 2014/11/18 (火) 18:05:11 - mbb
ゲル濃度を変更したほうが良いのでは
ないでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.3562-5 - 2014/11/18 (火) 17:58:57 - au
失礼しました。
書き方が適当でなく申し訳ありません。

ウェスタンブロットを行う際の、内部コントロールです。
Histone H1が適当なことは承知しているのですが、使用しているゲル濃度から、Histone H1は厳しいので、もう少し分子量の大きなものを使用できないかと考えていました。

(無題) 削除/引用
No.3562-4 - 2014/11/18 (火) 17:49:00 - AP
ハウスキーピング(遺伝子)の定義を確認しましょう。理解・用法が間違っているようです。

(無題) 削除/引用
No.3562-3 - 2014/11/18 (火) 17:45:19 - AP
>核蛋白質のハウスキーピング

意味不明。


GAPDHはハウスキーピング遺伝子に分類される遺伝子にコードされる核タンパク質であるかどうかということを聞いているのか?そうとしか読めないぞよ。

まさか、核タンパク質をウェスタンブロットするときの内部標準としてGAPDHが適当であるかどうかを聞いているのではあるまいな?

書くこと、つまり自分の考えを間違えなく伝える能力・努力も科学者に必要な資質です。

核蛋白質のハウスキーピング 削除/引用
No.3562-1 - 2014/11/18 (火) 17:18:30 - au
ウェスタンブロットを計画しているのですが、核蛋白質のハウスキーピングとして、GAPDHは適当ですか?
また、他に推奨されるものはあるでしょうか?

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