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解決しました。 削除/引用 No.3528-13 - 2014/11/11 (火) 19:00:46 - いけ みなさん、いろいろとアドバイスありがとうございました。 結局のところ３７度インキュベーターに入れたところうまく固まりました。 当方、北国の研究室のため気温の影響が強くでたということでしょうか。 勉強になりました。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3528-12 - 2014/11/11 (火) 07:40:51 - Harmonia アクリルアミド溶液の作り直しはしましたか？

(無題) 削除/引用 No.3528-11 - 2014/11/10 (月) 16:53:18 - ~ 今回は室温の問題だと思いますが。 私がSDS-PAGEを頻繁に使用しているチームにいた時は、 1.5mLチューブにAPSを0.1gずつ分注して冷蔵庫に保管しておき、 使うときに上から水を1mL足してAPS溶液を調製していました。 作ったAPS溶液はそのまま冷蔵保存して使い回し、 使い切ったら次のチューブに水を入れて調整します。 1mLしかありませんのでだいたい1~2週間で使い切っていましたし、 古くなったと思ったら1mL未満ですので気兼ねせずに捨て、 新しいチューブに水を足せば直に作り直すことができます。 新鮮な溶液と手間の省略の双方のバランスが取れたいいやり方だと思っていました。

(無題) 削除/引用 No.3528-10 - 2014/11/10 (月) 13:05:59 - p 数年物のAPSを使うと固まらなかったことがあります。 そんなに高価なものでもないので、私でしたら買いなおします。 TEMEDは多めに入れると分離が悪くなるという記事を見たことがあります。 （https://www.yodosha.co.jp/jikkenigaku/nucleic_acid/vol3.html） APSは10%溶液にして3か月程度なら室温で放置したものでもきちんと固まった経験があります。 当研究室では2,3か月で使い切れる量にして溶液を冷蔵保存していますが、半年程度では固まらなくなったことはありません。 学生のときは小分けにして冷凍保存していました。 ほかの方も書かれていますが、個人的には 1. 粉末はデシケーターに入れて保存 2. なるべく新しいものを使う 3. ゲルを固める温度は20-25℃くらい とするようにしています。

(無題) 削除/引用 No.3528-9 - 2014/11/10 (月) 12:21:16 - 台風一家 今まさにWesternをやってますが、SDSページゲルが固まらなくて困ったことは 一度もありません。 APSは多めに作って小分けして-20℃で保存してますが、それでもゲルが固らな かったことはありません。何度か凍結融解して使っても毎回ちゃんと固まります。 確かに、温度の影響を受けると思います。冬場は多めに入れた方が固まりやすい と思います。あと、APSやTemedを入れる前に液を脱気してます。どれだけちゃんと脱気できてるかはわかりませんが。。。

(無題) 削除/引用 No.3528-8 - 2014/11/10 (月) 12:21:08 - み >[Re:7] ALさんは書きました : > APSはやはり用事調製のほうがいいのですかね？ > 私も経験的に湿気てしまったAPSでは綺麗に固まらなく（固まる速度も遅い）困った経験があります。 > > 毎回測ってというのは面倒なのですが、何か良い方法はありませんか？ > （例えば冷凍保存したらいいなど） １０％APSは小分けして冷凍保存しています。 それで問題が起こったことないですよ。 しかし、２，３か月で使い切るくらいの量しか作らないので、半年、一年と長期保存に適しているかは不明。 御参考まで。。。

(無題) 削除/引用 No.3528-7 - 2014/11/10 (月) 11:50:21 - AL APSはやはり用事調製のほうがいいのですかね？ 私も経験的に湿気てしまったAPSでは綺麗に固まらなく（固まる速度も遅い）困った経験があります。 毎回測ってというのは面倒なのですが、何か良い方法はありませんか？ （例えば冷凍保存したらいいなど）

(無題) 削除/引用 No.3528-6 - 2014/11/10 (月) 10:47:01 - み 室温は重要ですね。 昔いたラボは冬は固まらなくて、37度インキュベーター内に入れたら普通に固まった。

(無題) 削除/引用 No.3528-5 - 2014/11/09 (日) 13:57:50 - Yayoi 私は今ソルトレイクに留学中ですが、ゲルがほんとに固まりません。 Walmartでdesktopヒーターを購入して、ゲル板に当てながらゲルを作製すると物の見事に綺麗に固まります。突然、とのことですので、季節の影響かと思います。

(無題) 削除/引用 No.3528-4 - 2014/11/08 (土) 22:01:10 - TEMED TEMEDとAPSはデシケーターで乾燥してるとこで保管しています。

(無題) 削除/引用 No.3528-3 - 2014/11/08 (土) 19:04:51 - NM 時節柄、かたまりにくいかとは思いますが、 まずはAPSとTEMEDを多めにしてみてはいかがでしょうか。 おおさんの言うように、温度依存性があるので、 真冬日は37℃のインキュベータに入れて固めることもあります。 それと、特に古い試薬などありませんか？ どの試薬も古いと固まらない原因となります。 （Trisはあまり聞いたことはありませんが） 古い試薬は更新した方が良いです。

(無題) 削除/引用 No.3528-2 - 2014/11/08 (土) 15:04:56 - おお わたしのいるラボに来たとき、おそらく湿気によりだめになった粉末APSのボトルがいっぱいありました。どれを使ってもだめという。。。 ただ保存さえよければ大丈夫と思うので、買ってみてそれが原因か見てみるのもよしではないでしょうか。それか隣のラボでワークしているものを数回分だけでも分けてもらうとか。 その1cmほど短くなっているのは液量が見た目は変わらないが重合したゲルが短いっていうことですよね。 あと重合は温度にも依存することがあります、冬場で室温が夏場よりかなり低くなっているならそれも一因の可能性があります。暖かいところで重合するとか、少しばかり多めにAPSを入れるとかで解決することはします。

SDS-PAGEのゲルがゆるい？ 削除/引用 No.3528-1 - 2014/11/08 (土) 13:32:31 - いけ 初めて質問させていただきます。 自作でSDS-PAGE用のゲルを作っています。 今まで何度か作成したときは良好なゲルができていたんですが、突然全く固まらなくなりました。 以前にも同じ経験があったため、10％APSを作り直して再度やってみたものの（APS自体は同じものです）、固まりはするのですが、重層した蒸留水が徐々に低下していき、もともとのゲルを流したラインより１ｃｍほど下まで縮んでしまいます。ゲル自体もゆるく、泳動してもサンプルがうまく流れません。 プレートからゲルが漏れたりはしていません。 やはりAPS自体買いなおしたほうがいいのでしょうか？ 解決策が思い当たらず苦戦しています。 どうかよろしくお願いいたします。

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