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(無題) 削除/引用 No.3525-6 - 2014/11/08 (土) 13:25:58 - yyy 質問者さんのラボでは「クロスリンク」と言えば特定のものを指すのかも知れませんが、一般にはその言葉の指すところは非常に広いので、もう少し詳細が必要ですね。

(無題) 削除/引用 No.3525-5 - 2014/11/08 (土) 12:41:56 - おお 300mM Sodium Chloride is higher than the general condition to see protein interaction.

(無題) 削除/引用 No.3525-4 - 2014/11/08 (土) 09:38:41 - なんで どうしてこういう人種は質問するときに必要な情報を隠蔽するのだろう？ 推理クイズですか？

(無題) 削除/引用 No.3525-3 - 2014/11/08 (土) 07:55:11 - mon 「クロスリンクの実験」がタンパク・タンパク間なのかそれ以外なのか不明ですし、クロスリンカーの種類も不明なので反応性がわからずお答えしようがないです。 タンパク・タンパク間だとして相互作用の検証は生理的（であると考えられる）状態で行うのが普通ですが。 強いていえば、 イミダゾールがクロスリンカーと反応している、高塩濃度がタンパク相互作用を阻害している可能性が、考えられます。また、Niカラムだけでは精製度が通常低いので、不純物が阻害している可能性もあります。ゲル濾過等で低分子（塩・イミダゾール・SDS-PAGEで見えすらい不純物）を除くだけで改善することも多いです。

(無題) 削除/引用 No.3525-2 - 2014/11/08 (土) 03:03:54 - おお >[Re:1] ののちゃんさんは書きました : > 実験の手段は他の人がクロスリンクをしてうまくいった方法と同じように行っています。タンパク質が異なると手段も変えなければいけませんか？ The same method may not work. This happens often. > > クロスリンクがうまくいかないときタンパク質に問題があるとすれば何が悪いのでしょうか？ God knows. > > バッファーが架橋を阻害しているのでしょうか？溶出バッファーにはリン酸バッファーを用いておりまして、そこに300mMの塩と溶出するためのイミダゾールが含まれています。 It depends. What kind of cross-linker are you using. Did the condition work for the other proteins you mentioned above? > > クロスリンクがうまくいかない経験がある方はなにが駄目だったのかを教えていただけるとありがたいです。 Are you sure the protein you are using forms complexes? You might want to use the other proteins which can be cross-linked under the condition as positive control.

クロスリンクについて 削除/引用 No.3525-1 - 2014/11/08 (土) 02:38:23 - ののちゃん 今、クロスリンクの実験を行っているのですが全くうまくいきません。 Hisタグをつけたリコンビナントなタンパク質をNiカラムで精製して、その溶出したものをクロスリンクに用いているのですが、うまくいきません。 実験の手段は他の人がクロスリンクをしてうまくいった方法と同じように行っています。タンパク質が異なると手段も変えなければいけませんか？ クロスリンクがうまくいかないときタンパク質に問題があるとすれば何が悪いのでしょうか？ バッファーが架橋を阻害しているのでしょうか？溶出バッファーにはリン酸バッファーを用いておりまして、そこに300mMの塩と溶出するためのイミダゾールが含まれています。 クロスリンクがうまくいかない経験がある方はなにが駄目だったのかを教えていただけるとありがたいです。

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