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(無題) 削除/引用 No.3508-6 - 2014/11/05 (水) 13:55:18 - おお >[Re:1] Komattachanさんは書きました : > 逆に、野生型由来細胞で得たデータと別のタイミングでノックアウト由来細胞から得たデータを比べることは厳しいですよね。 これも指摘がすでにある遺伝的バックグランドがすでに均一化されているとするならとくに、やってみないとわからないでしょう。そう言うことも含めてデーターをとっていけばいいのではないですか?

(無題) 削除/引用 No.3508-5 - 2014/11/05 (水) 03:55:36 - おお >[Re:3] Komattachanさんは書きました : >一般的なことなのでしょうか。 ひつようで可能ならやればいいのではと。不可能なら考え直せばいいし。 なぜ一般にこだわるのだろうか。。。

(無題) 削除/引用 No.3508-4 - 2014/11/05 (水) 02:20:25 - 小児科医師（ゆとり教育） どの点を心配しているのかはっきりしませんが、生後すぐや妊娠18日齢で組織を採取し、神経細胞の初代培養をすることは可能だと思います。Genotypingに少し時間がかかるPCRプロトコールならば、複数のマウス子から初代培養を開始しておき、その後Genotypingして遺伝子型が判明したら、必要なサンプルを保存し不要なものは捨てるという手順でいいと思います。すごくアンラッキーな人でなければ、8匹もやればそれぞれの遺伝子型が一つは採取できると思います。

有難うございます 削除/引用 No.3508-3 - 2014/11/04 (火) 21:17:02 - Komattachan 7744先生 ご回答有難うございます。 マウスを維持管理しながらの実験経験が全くないため、初歩的な質問をしてしまっていたようで恐縮です。 おっしゃるように確かにKOマウスからの交配ではWT.ヘテロ.ホモKOが生まれてくるので問題ありませんね。 ただ、もうひとつ疑問が残りますので質問させて下さい。 生後すぐ、または妊娠18日齢などの胎仔の状態でgenotypingしてこれら３種類のマウスを分けて初代培養することは一般的なことなのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3508-2 - 2014/11/04 (火) 18:33:12 - 7744 > 理想的には、野生型マウスとノックアウトマウスそれぞれから同じタイミングで調製した細胞を用いるべきと思いますが、 特殊な状況でないなら、全く難しくないです。 というか通常の方法です。 因子AをノックアウトしたマウスはKO同士で交配させているのですか？ 通常はヘテロとヘテロを交配させると、仔供にはWT・ヘテロ・KOの全ての種類が生まれてくるはずなので、その仔供の中からKOとコントロールを選んで実験すると思いますが・・・ そうすればコントロールもKOも生年月日は全く同じマウスで実験できますよね？ また、バッククロスが終わっていないKOの系統だと、親の組み合わせによって遺伝子背景が大きく異なることがあるので、兄弟で実験するという方法以外はダメだと思いますよ。

野生型とノックアウト由来細胞での実験タイミング 削除/引用 No.3508-1 - 2014/11/04 (火) 17:49:58 - Komattachan 野生型マウスと因子Aをノックアウトしたマウスをそれぞれ自家繁殖することで維持しています。今回、それぞれ由来の神経細胞を初代培養し、とある細胞毒性に対する因子Aの影響を評価したいと考えています。 そこで質問です。 理想的には、野生型マウスとノックアウトマウスそれぞれから同じタイミングで調製した細胞を用いるべきと思いますが、現実的には同じ日に同じ妊娠週齢のマウスを用いることは難しいと思います。 逆に、野生型由来細胞で得たデータと別のタイミングでノックアウト由来細胞から得たデータを比べることは厳しいですよね。同じタイミングで実施すべきコントロール実験（つまり野生型由来細胞での結果）がないことになるので。 このような実験をされている先生方はどのようなプランで実験をされていますか？ ご教授ください。

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