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(無題) 削除/引用 No.3486-8 - 2014/10/29 (水) 22:20:53 - もしもーし？ 生きてますか？質問者さん？

(無題) 削除/引用 No.3486-7 - 2014/10/29 (水) 00:40:50 - それで 質問者は指摘されたことはちゃんと確認しましたか？ ん？

(無題) 削除/引用 No.3486-6 - 2014/10/27 (月) 23:07:26 - おお >別のシングルカットの酵素で4kbのバンドが出るか確認すべし。 私もそう思う。 あと切れにくい酵素とか、DNAの精製でカラムからのキャリーオーバーでアルコールやその他のバッファーが混入して切れにくい環境になっているとか、DNAがきれいじゃないとか(精製度が低いと極端に切れにくくなる酵素がある。たいていカタログにそう言う酵素の性質が書いてある)。 制限酵素処理していないものを同時に流すと、その2kbpが、切れないために見えてるのかたいてい確認できると思う。

(無題) 削除/引用 No.3486-5 - 2014/10/27 (月) 20:56:49 - 774R 別のシングルカットの酵素で4kbのバンドが出るか確認すべし。 ほかの酵素でも切ってバンドパターンが整合してるか確認。プラスミドが正しいことを確認。 メチル化で切れなくなる酵素もあるので確認すべし。ちなみに酵素は何？ その酵素で切れる別のプラスミドは切れるか確認。酵素活性の確認。 これくらいやってから質問するといいと思いますよ。

(無題) 削除/引用 No.3486-4 - 2014/10/27 (月) 20:50:24 - AP 全くきれていなくてcccだと4 kbだ線状の2 kbくらいの移動度になると思いますが。 酵素が失活しているとかじゃなければ、認識配列がメチル化されているとか。

(無題) 削除/引用 No.3486-3 - 2014/10/27 (月) 20:49:45 - ああ mon様 配列はコピペで検索しています。また、プラスミドをただ直鎖にしているため、バンドの現れ方としてはプラスミドと同じサイズであると考えております。私のラボでは一つのプラスミドしか扱っていないため、別のプラスミドの混入はないと思います。

(無題) 削除/引用 No.3486-2 - 2014/10/27 (月) 20:40:53 - mon (1)「NEB cutterに配列を打ち込み」とありますが、もしかして手入力ですか？ (2)未切断のplamidのバンドでは？ (3)別のplasmidが混入していませんか？

制限酵素反応後の電気泳動の結果 削除/引用 No.3486-1 - 2014/10/27 (月) 20:23:36 - ああ いつもお世話になっております。 約4kbpのベクターを直鎖にするためにNEB cutterに配列を打ち込み、1cutで切る制限酵素を検索した後、実験を行い泳動しました。本来4kbpの位置に確認できるバンドが約2kbpにも確認できました。スター活性が原因だと想定しています（未だにスター活性の原因を分かりませんが）が、なぜその位置に目的以外のバンドが確認できたのか分かりません。要因として、どのようなことが考えられるでしょうか。ご回答よろしくお願い致します。

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