全22件 ( 21 〜 22 )　 前 | 次 　1/ 1. 2. /2

(無題) 削除/引用 No.3456-2 - 2014/10/14 (火) 20:47:47 - おお 意図した開始コドンから始まらないと言うことはあるかと思いますが、だからといって、タグを飛ばして始まっているとも限らないので、特異的抗体で確かめるべきではないでしょうか。ただWBは検出感度がいいのでng以下でも検出できるというのは把握しておくべきです。 tagに対しての抗体はポジコンを同時に流しましたでしょうか? もしSD配列をいじってないなら、高次構造による阻害かもしれません。あとタグがSD配列として機能してしまっているなら、ATGが近すぎるかもしれません。 典型的な例でSD配列から10ベースぐらい離れてATGがあると効率がいいようですが、20ベースはなすと効率がかなり落ちるということもあるのでタグで距離が出ているとどうなんでしょう、、、そこで始まる可能性は。

開始メチオニンについて 削除/引用 No.3456-1 - 2014/10/14 (火) 19:17:24 - okam 大変お世話になっております。 ある遺伝子のコード領域のN末端にエピトープタグをknock-inを行いました（本来の開始コドンの直前に”開始コドン＋エピトープ配列”を挿入）。 エピトープタグの挿入自体は該当領域のgenome PCRとpBluescriptへのクローニングからのシークエンスで確認できております。もちろん、in-frameでもあります。 しかし、タンパク質レベルで、エピトープタグの抗体によるWBによって発現確認ができず困っております。分解の可能性も疑ったのですが、25kDa-300kDaくらいまで、knock-inしていないコントロールと差がありません。 その遺伝子本来の開始コドンは開始コドンとしての役目を果たしていないと考えたいのですが、他方で、エピトープタグに付加してある開始コドンを読み飛ばして、遺伝子本来の開始コドンから翻訳が行われる可能性はないのか、とも考えております。 そこで現在は、遺伝子本来の開始コドンを除去する形でのknock-inを考えております。 発現ベクターのコンストラクションなども含め、こういった開始メチオニンを残した形での数アミノ酸のN末端付加について、同じような経験をお持ちの方がいらっしゃいましたら、ご教授いただきたく思います。

全22件 ( 21 〜 22 )　 前 | 次 　1/ 1. 2. /2

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---