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(無題) 削除/引用 No.3441-13 - 2014/10/08 (水) 23:27:42 - おお なんかいやってもそうなるなら、何か間違ったものをつかっているか間違ったことを正しいと思ってやってるかだとおもいます。 バッファーでpHを合わせないでいい系がありますTris-Glycine は両者の比でpHを設定できるので混ぜたあとHClやNaOHでpHをあわせるとかえって変なことになります。 またちょっと紛らわしいかもしれませんが、TRISでも商品によってはあらかじめ塩酸塩になっていて解かすとpH7.4のバッファーになるとかそう言うのもあります。これは通常のpHをあわせるTrisと別物です。HEPESなんかでもそう言うのがありますし。なので試薬棚にある使ったバッファーの粉末のボトルなどもチェックしてみるといいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3441-12 - 2014/10/08 (水) 20:49:48 - 名無し なるほど！ まず一番簡単にできるｐHのチェックから手を付けます。 ほかの方もご回答ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.3441-11 - 2014/10/08 (水) 16:10:38 - qw SDSで沈殿というと、カリウムとかグアニジンはどうだろねえ？ 万が一、サンプルがKClやリン酸カリウムを多く含んでいると、沈殿することもあるね。 ＞マーカーのレーンでも析出物が現れます。 だから、こんなもんじゃないのだろうね。

(無題) 削除/引用 No.3441-9 - 2014/10/08 (水) 12:50:44 - さく SDSが古いとか。分解するのか？、pHが極端に変わることがあります。

(無題) 削除/引用 No.3441-8 - 2014/10/08 (水) 10:58:13 - mon precast gelにはSDSが含まれていないモノも有るので、自作ゲルにSDSを添加しないで作ってみたら(無責任モード）?　なお、泳動バッファーにはSDSは必要。

(無題) 削除/引用 No.3441-7 - 2014/10/08 (水) 09:29:23 - ~ 書きだすのであれば、何水和物か等の細かいところまで、試薬瓶のラベルを見直して書き出したほうがいいでしょう。 ただ、リン酸塩だと無水と十二水和物で分子量が大きく変わって間違えると析出したりすることもありますが、 トリス系だと10xTBSをそのまま使っているとかですかね。

(無題) 削除/引用 No.3441-6 - 2014/10/08 (水) 09:04:33 - て > 既製品のゲルでは、この析出物は現れません。 > マーカーのレーンでも析出物が現れます。 この記述から、サンプルより自作ゲル（泳動バッファーも？）に問題ありのようです。 すでに指摘されているようにゲルの組成と作製法、あとは念のため泳動バッファーの組成と作製法を、できるだけ詳しく記載するとすぐわかりそうですけど。

(無題) 削除/引用 No.3441-5 - 2014/10/08 (水) 05:57:34 - おお サンプル量がおおかったり、サンプルに含まれるものによっては蛋白やSDSが沈殿したりしてみだれますが、precast gelではうまくいくんですよね。

(無題) 削除/引用 No.3441-4 - 2014/10/07 (火) 23:46:12 - yyy gelのpHか塩濃度とかは大丈夫でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3441-3 - 2014/10/07 (火) 23:11:08 - 中年 サンプルはどのようなもので、どんなバッファーに溶けていますか？

(無題) 削除/引用 No.3441-2 - 2014/10/07 (火) 22:43:54 - おお なにかおかしいと思います。バッファーの組成やpHなど見直してください (こちらに書き出せば間違いを指摘できるかもしれませんが、、、それは強制できませんのでご自身の判断で)。running bufferにSDSが入ってないとえいどう中にあぐってへんになることがあります。

SDS-PAGEの析出物 削除/引用 No.3441-1 - 2014/10/07 (火) 19:01:07 - 名無し タンパク質サンプルをSDS-PAGEで泳動すると、ゲルの上のほう（濃縮ゲルだったり、分離ゲルだったりします）で、 ほぼ横一列に析出物が見えます。この析出物は、CBB染色でタンパク質同様青く染まります。 また、レーン間には析出物は見られず、レーンにあわせて析出してきます。 この析出物で目的のタンパクがトラップされているのか、析出物より下では、本来見えるはずのバンドが消えて見えなくなってしまうことが多いです。 ポジティブコントロールさえもそれで消えてしまうので大変困っています。 ゲルを作るときのBufferも何度か作り直してトライしてみたのですが、 失敗することが多いです。 10％APS、TEMEDは新しいものを使っています。 既製品のゲルでは、この析出物は現れません。 マーカーのレーンでも析出物が現れます。 どなたかこの析出物が現れる原因と、解決法に心当たりがあればご教授ください。 よろしくお願いします。

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