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(無題) 削除/引用 No.3440-9 - 2014/10/07 (火) 22:32:09 - おお おかしいと思ったら、真っ先に確認するところだったのでずっこけてます。

(無題) 削除/引用 No.3440-8 - 2014/10/07 (火) 12:23:05 - エネゴリ ささいなことでずっこけていました。感謝してます。

(無題) 削除/引用 No.3440-7 - 2014/10/07 (火) 11:40:37 - ごんべえ お役に立てて光栄です〜。

(無題) 削除/引用 No.3440-6 - 2014/10/07 (火) 11:27:11 - エネゴリ 発見しました。F2Aの前に終始コドンが入ってました。ご指摘ありがとうございました。助かりました。

(無題) 削除/引用 No.3440-5 - 2014/10/07 (火) 10:27:44 - ごんべえ F2AでつなげているのでcDNAの後にstop codonをいれていないか、cDNA以後Frame shiftしてないかはもちろん確認済みですよね？

(無題) 削除/引用 No.3440-4 - 2014/10/07 (火) 10:23:15 - エネゴリ ベクターのcDNA~pAまでシーケンスで確認して、mutationは入っていませんでした。cDNAの配列は、他の論文のクローニング領域をまねたので大丈夫とは思ってましたが・・・。トランスフェクション効率が低い可能性もありましたね。。。

(無題) 削除/引用 No.3440-3 - 2014/10/07 (火) 10:05:59 - ~ 現時点では何がどこまで確認できているのでしょうか？ >EF1Pro-cDNA-F2A-EGFP-pAの発現ベクターを構築 のEGFPが削れていれば、光らなくてもおかしくありませんし、 プロモーターを削っていても光らなくてもおかしくありません。 ベクターの精製度が低く、トランスフェクション効率が非常に低い場合も光りませんね。

(無題) 削除/引用 No.3440-2 - 2014/10/07 (火) 09:59:04 - おお いやそれだけじゃあちょっとわかりませんよ。考えられることはフレームがあっているかどうかと開始コドン周辺の配列、5'UTRが含まれているかとか、、、

発現ベクターがワークしない 削除/引用 No.3440-1 - 2014/10/07 (火) 09:47:49 - エネゴリ 発現ベクターがワークしないので質問させてください。致命的な間違いがあればご指摘を受けたいです。 EF1Pro-cDNA-F2A-EGFP-pAの発現ベクターを構築し、マウスES細胞にトランスフェクションで入れても、全くEGFPが光りません。コントロールであるEF1Pro-F2A-EGFP-pAはEGFP (cDNAを含まない)は、トランスフェクションして24時間後にEGFP陽性の細胞を多く観察できたので、トランスフェクションには問題ないと考えてます。ベクターの配列に何か致命的な間違いがあるのでしょうか？

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