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(無題) 削除/引用 No.3428-9 - 2014/10/21 (火) 17:18:07 - 弘法 最初のストックの話でも書きましたが、SCにはTrpなど光に弱い成分もあるので、ガラス瓶より50mLチューブの方が沈殿が出やすいというのは、UVによる劣化の影響もあるかもしれません。それを恐れてという訳ではないのですが、私自身はプラスチックチューブに未使用の培地を入れて室温で保存することはしていません。

(無題) 削除/引用 No.3428-8 - 2014/10/21 (火) 04:58:56 - kh 弘法さん どうもありがとうございます。酵母の質問すると、毎度弘法さんに回答いただいているような気がします（酵母だけに）。感謝しきりです。 少なくとも気にせずに使用されていて問題がないということなので、こちらも特に気にせずに行こうかと思います。普通に考えてNitrogen baseの何かなんでしょうかね（あるいは添加したアミノ酸、もしくは変色した糖かもしれませんが）。沈殿している以上溶液の成分が多少なりとも変わっている可能性もあるので、個人的には弘法さんと同じく撹拌してから使おうと思います。ご回答ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3428-7 - 2014/10/21 (火) 00:23:02 - 弘法 時間が経つと確かにモヤモヤした沈殿が出ますね。長年そういうものだと思って使っていたので、既に疑問も感じなくなってしまっていました（良くないことですね）。 私自身は均一に撹拌してから分取するようにしていますが、気にせず上清を取って使っている人もいます。いずれの場合も大きな問題はないようです。

(無題) 削除/引用 No.3428-6 - 2014/10/20 (月) 10:32:48 - kh このトピックに追加するのも少しおかしい気もしたんですが、新しいトピックを立てるほどでもないと思えたので、培地に関してもう一つ積年の疑問を追加させていただこうと思います。 SC-Uraなどのドロップアウト培地なんですが、長期間保存していると茶色い沈殿が生じることがあります。培地は透明なままで、容器を振るとさらさらとちょっとずつ溶解していく感じであり、コンタミの類ではないと思います（特に50 mLチューブなど、底の方が小さくなっている形状の容器で出現しやすい印象です）。 実際に使ってみて特に生育に問題はないように思えたので、（滅多に使わないドロップアウトで古いものを使う場合など）そのまま使うこともあるんですが、この沈殿が一体何者の析出なのか、使うとして沈殿させたままでいいのかよく振ってから使った方がいいのか等について、何かご存知の方いらっしゃいましたらご教示いただけると幸いです。よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.3428-5 - 2014/10/04 (土) 00:15:57 - kh アドバイスありがとうございます。 今まで見てきたどのラボでも、-Ura, -Ura-Leu, -Ura-Leu-Trp, -Trp, ...等々と、大量のdrop out mixを作っていたのでそうした方がいいのかなと思っていたのですが、使いそうな全てのアミノ酸（UraやAdeもあるので“アミノ酸”はやや不適でしたね。「核酸・アミノ酸」の方が適切でしょうか）のdrop out mixを作製し、必要なアミノ酸を培地作製時に随時加える、という方が、drop out mix作製における面倒くささやミスするチャンスを考慮すると賢いように思えるので、その方法で特に問題ないようであればそうしようと思います。 100xを作れるのであれば、全てのアミノ酸を加える場合でも十分な容量の余裕があると思うのでいいですね。10xだと、沢山のアミノ酸溶液を添加する場合に最終容量を超えてしまうこともあるかもと危惧していましたが、杞憂なようで何よりです。 Methods in yeast geneticsのご紹介もありがとうございました。割とこれまでも酵母を扱ってきたのに、一切目を通したことがなかった（…以前に存在を知らなかった）のでありがたいです。図書館に蔵書があったので、早速借りてみようと思います。こういうメソッド本の類ってワクワクしますよね。手元に置いたワクワク感に満足して、結局大して目を通すことなくその辺でほこりを被っている…とかいうありがちなパターンにならないように気をつけます。 アドバイスいただけた皆様ほんとうにありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3428-4 - 2014/10/03 (金) 12:33:43 - papa Methods in yeast geneticsを見ることをおすすめします。 そこには，各々100〜500倍濃度の溶液を作成してオートクレーブして保存。 いくつかは低温では沈殿するので室温で保存しなければならない等の注意事項が記載されています。

(無題) 削除/引用 No.3428-3 - 2014/10/03 (金) 12:27:27 - 弘法 Ura、Leu、Trp、Hisの４つであれば、100xストックがオートクレーブ可です。おおさんの仰るようにTrpストックは遮光しておいた方が良いです。Ura、Leu、Trpは室温保存で大丈夫ですが、Hisは4℃保存の方が良いようです。

(無題) 削除/引用 No.3428-2 - 2014/10/03 (金) 02:00:05 - おお 確かにフィルターのほうが滅菌はいいでしょうけど、オートクレーブですますひともまあまあいますね。クロンテックのイースト用培地には15分以オートクレーブするなと書いてあったりしたと思います。 あとアミノ酸全部についてはしりませんが、意外と室温でほっといても平気みたいです。ただ光で芳香環をもつものは壊れるようで、実験台においておくと徐々に黄色くなってきたりするものはあります。そう言う意味で4度保存しておけば光にさらすこともあまりなくなりますし、日持ちするんでないかと。

酵母培地のアミノ酸ドロップアウトミックス 削除/引用 No.3428-1 - 2014/10/02 (木) 23:31:02 - kh 酵母培地で使うdrop out mixなんですが、「色々なパターンのdrop outを使うのに便利」「いくつかのアミノ酸を濃度振ってtitrationをしたい」といった理由から、-Ura-Leu-Trp-His……のようによく使うアミノ酸を複数欠失させたmixを作り、そこに別で作成しておいた10xUra等添加したいアミノ酸を加えて必要なdrop out mediumを作ろうかと思っています。 理論上はそのやり方でも特に問題ない気はするのですが、「10xアミノ酸は分解しやすいから作り置きの10x溶液はよくないぜ」「一度オートクレーブした10xアミノ酸を実際の培地作成時に加えてまたオートクレーブするとアミノ酸によっては働かなくなることもあるからオススメしないよ」 といった、見落としがちな落とし穴があったりしないか心配しています（上記は自分で勝手に作った真偽不明の適当アドバイスです）。 酵母に詳しい方、何か気をつける点、あるいは全く問題ないという意見でも、アドバイスありましたら大変ありがたく思います。よろしくお願いします。

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