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電子顕微鏡で金コロイド標識2次抗体を使いたい トピック削除
No.3421-TOPIC - 2014/10/01 (水) 18:41:44 - 電顕
特定の細胞がそこにあるか確かめたいため、電子顕微鏡で金コロイド標識2次抗体を使いたいのですが

分からないことが2点あります

@一次抗体のアイソタイプを選び方がわかりません。細胞が出す特定のたんぱく質を検出したいわけではなく、細胞がそこにあるかないかを判断したいのでアイソタイプは一次と二次があえばよいのでしょうか?


A抗体の選び方として
 例)マウスの細胞に反応させたい場合
   一次抗体 抗マウス モノ(あるいはポリ)クローナル抗体
   二次抗体 抗マウスIgG(あるいはほかのアイソタイプ)
         ヤギ(マウス以外の動物)ポリクローナル抗体

   でしょうか?
    
混乱してきました・・・
 
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(無題) 削除/引用
No.3421-3 - 2014/10/03 (金) 14:34:19 - おお
電顕で見るのだったら核とか形態的なものでも判断できると思うのですが、、、

まそれは実験目的その他がよくわからないので、、、細胞があるかどうかといっても、細胞の何かタンパク質なりを検出しないと、おそらくその検出系が成り立たないですよね。。。

たとえば一次抗体をマウス抗アクチン抗体をつかうとしましょう。アクチンはマウスアクチンの抗体でも、ほかの生物種の抗体でも、マウスアクチンに反応すれば何でもいいです。そうすれば一次抗体がIgGなら二次抗体は抗マウスIgGでアイソタイプスペシフィックなものは必要ないです。抗マウスIgGは別にヤギ抗マウスIgGであろうがラビット抗マウスIgGであろうが抗体さえしっかりしたものであればいいです。特に一次抗体にポリくろをつかうならあいそタイプは意味がありませんよ。

抗マウス モノ(あるいはポリ)クローナル抗体ってかくと何の抗体かサッパリわかりません。

まうすから精製した抗体はマウス抗XXX抗体といいます。XXXは抗原名です。抗マウスモノクローナル抗体はなにか動物にマウス個体をすりつぶしたものを注射してて作った抗体かと突っ込まれるかもしれません。

??? 削除/引用
No.3421-2 - 2014/10/03 (金) 12:32:34 - ema
なにか特殊な染色であったらごめんなさい。
>一次抗体 抗マウス モノ(あるいはポリ)クローナル抗体
>二次抗体 抗マウスIgG(あるいはほかのアイソタイプ)
         ヤギ(マウス以外の動物)ポリクローナル抗体
>金コロイド標識2次抗体
なら2次抗体といっているところは金コロイド抗体だと思います。

細胞があるかないかだけでしたら
Goat Anti-Mouse IgG H&L (xxnm Gold) preadsorbed
などをそのままかけて

それでは判別しにくいしIsotypeContをどうしもておきたいなら

 一次抗体 sample;rabbit,goat等抗マウス mono(poly)Ab
      normal:normal rabbit,goat Ab(IgG)(上記のポリとかとあわせる)

 二次抗体 抗rabbit,goat(1次抗体で使った動物種)IgG H&L (xxnm Gold) preadsorbed

だと思うのですが。

電子顕微鏡で金コロイド標識2次抗体を使いたい 削除/引用
No.3421-1 - 2014/10/01 (水) 18:41:44 - 電顕
特定の細胞がそこにあるか確かめたいため、電子顕微鏡で金コロイド標識2次抗体を使いたいのですが

分からないことが2点あります

@一次抗体のアイソタイプを選び方がわかりません。細胞が出す特定のたんぱく質を検出したいわけではなく、細胞がそこにあるかないかを判断したいのでアイソタイプは一次と二次があえばよいのでしょうか?


A抗体の選び方として
 例)マウスの細胞に反応させたい場合
   一次抗体 抗マウス モノ(あるいはポリ)クローナル抗体
   二次抗体 抗マウスIgG(あるいはほかのアイソタイプ)
         ヤギ(マウス以外の動物)ポリクローナル抗体

   でしょうか?
    
混乱してきました・・・

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