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(無題) 削除/引用 No.3400-6 - 2014/10/01 (水) 12:34:28 - HIH そもそもWB用のポリクロでFACS染色してもノンスぺが高すぎて正確な結果は得られないと思いますが。 KOマウス由来細胞などでNCを取れないならやるべきではないかと。

(無題) 削除/引用 No.3400-5 - 2014/09/25 (木) 18:02:04 - えー IFやIHCに使えない抗体なら、SDSをいれても期待できないと思うのですけど。 分子内にS-S結合が無くて、エピトープがタンパク質の外部にあるなら別ですが。 完全にSDS化してタンパク質の構造を壊す事ができたとしたら、細胞も壊れてると思いますよ FACS用の抗体を買うのが、最もポピュラーです。

(無題) 削除/引用 No.3400-4 - 2014/09/25 (木) 17:52:44 - か WBでは強いシグナルが出るけれど、IFがうまくいかない抗体でFACSをしなければいかなくなって、SDS変成が必要なのかなと思ってました。 0.1%位のSDSでやってみて染まらなかったら他の賦活を試してみようとおもいますが、どれが一番ポピュラーなんでしょう。。抗体はポリクロです。 PFAで固定した細胞懸濁液にSDSを入れても、もうゲノムは溶け出してこなくてさらさらなので、固定さているんだなとちょっと実感しました。

(無題) 削除/引用 No.3400-3 - 2014/09/25 (木) 13:37:18 - おお ああFACSの染色ならちょっとやり方がかぎられてくるなぁ

(無題) 削除/引用 No.3400-2 - 2014/09/25 (木) 13:34:09 - おお SDS入れなくても染まるケースは多々ありますけど、、、染まらないということならやってみる価値はあるとはおもいます。そのほかにもえっていうようなほうほうがいくらかありますけど、抗原の賦活化などでぐぐればでてくるとおもいます。SDSを使うのはあまりきいたことがないので、優先順位をどこに持ってくるかというのはありますけど。 http://www.aichi-amt.or.jp/labo/patho/reco/20090620_01.pdf >カッチカチに固めて カチカチぐらいだとおもいます。 って答えられても困るよね。それと同じぐらい質問にこまってます。 カッチカチだからSDSがきかないかということであればそれとこれはちょっと違うと思います。

FACS染色 WB用抗体 削除/引用 No.3400-1 - 2014/09/25 (木) 11:20:31 - か WB用抗体でFACS染色する場合、細胞を固定してから低濃度でSDSを入れれば、染まってくれそうな気がするのですが、PFAによる固定はタンパク質の構造をカッチカチに固めてしまうものなのでしょうか。抽象的ですみません。

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