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(無題) 削除/引用 No.3396-6 - 2014/09/24 (水) 10:22:08 - flowjoe 二次抗体無しの情報は？

標識もしくは解析 削除/引用 No.3396-5 - 2014/09/23 (火) 15:16:58 - ema 問題点はいくつも考えられます。 Westernできれいに出る抗体がFACSでうまく検出できるかは異なることがあります。新しく作るなり、売っていれば買うなりも検討してみては。 単純にエンハンスするならＢｉｏ標識にしてバックがもう少し高くなるかもしれませんがＳｔＡｖ-色素にしてみる。 また、解析で通常はそれくらいのレンジにしないとだめなのでログスケールですが、染色体の2Ｎ・4Ｎとかの判別のような原理的に差が出ないような実験ではリニアスケールで表示することもあります。

(無題) 削除/引用 No.3396-4 - 2014/09/23 (火) 07:51:34 - TK-1 Affinity purification.

(無題) 削除/引用 No.3396-3 - 2014/09/23 (火) 07:25:58 - ほし それと、miltenyiのFcRブロッカーは入れています。

(無題) 削除/引用 No.3396-2 - 2014/09/23 (火) 07:23:52 - ほし 組織を分散させて得た不均一な細胞懸濁液で染色しようとしてます。

FACS染色 削除/引用 No.3396-1 - 2014/09/23 (火) 07:22:19 - ほし ペプチドを免疫して作ったウサギポリクロ抗体で、高発現細胞を同定するために細胞内FACS染色しています。ウエスタンではシングルバンドになる抗体で、高発現細胞の当たりはRT-PCRでつけてあります。 ノックアウトマウス細胞とWT細胞でシグナル強度に差はあるのですが、あまり大きくありません。 （FacsDIVAで一次抗体なしが10^2、ノックアウト細胞が10^3、WT細胞が4x10^3位） ウエスタンではシングルバンド（ノックアウトでは消えます）ですが、バックグラウンドが高いのですが、一次抗体二次抗体の濃度をふって良いレンジを探す他に、なにかコツはありますか？ 二次抗体はanti-rabbit-Alexa647conjugate(invitrogen)を使ってます。抗体をラベルしてしまったほうがいいとかあるのでしょうか。

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