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(無題) 削除/引用 No.3393-2 - 2014/09/21 (日) 11:44:51 - mbb 追記 もちろん、Isotypeは蛍光標識されているので、 二次抗体は用いておりません。

免疫染色のコントロール 削除/引用 No.3393-1 - 2014/09/21 (日) 11:42:53 - mbb 免疫染色を始めて間もない者です。 現在、初代培養細胞の蛍光免疫染色を行っております。 目的の細胞に発現しているタンパクに反応する抗体を 一次抗体と蛍光標識された二次抗体を用いております。 染色した結果、期待したとおりに細胞が染色されました。 しかし、ネガコンとしてFACSに使用する蛍光標識された Isotype control（IgG1）を用いたところ、これも細胞を 染色してしまいました。 Isotypeの濃度や標識されている蛍光基質、メーカー等が 異なるので正しいコントロールとはいえないかもしれま せんが、Isotype controlで染色されてしまうことは 一般的にあるものなのでしょうか？ もしネガコンの結果が正しいとすると、一次抗体に特異 性がない、すなわち細胞を同定できていないと解釈すべき でしょうか？ ブロッキングにはPBS 5% FBS 0.1% TritonX100、抗体の 希釈にはPBS 1% BSA を用い、抗体の反応は4℃で一晩 でした。 まわりに相談できる経験者がいないので、なにかのヒント でもご回答いただけると助かります。 よろしくお願いいたします。

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