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タンパク質精製ステップ間(IEC→HIC)の脱塩の必要性 トピック削除
No.3379-TOPIC - 2014/09/15 (月) 09:04:17 - わたぼう
イオン交換クロマトグラフィーと疎水性クロマトグラフィーを用いて精製を行うのですが、このステップの間に脱塩操作は必要でしょうか?

イオン交換クロマトの溶出サンプルは高NaCl濃度ですが、これが次の硫安を用いた疎水性クロマトに影響を及ぼすのか否か…




Geヘルスケア様のサイトではイオン交換クロマト後は高塩濃度であるためそのまま疎水性クロマトに供することができると書いてあったり、目的タンパク質と同じ酵素群の精製論文では透析を行ったり、行わなかったりと頭を悩ませております。


みなさんは脱塩をおこなっていますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.3379-5 - 2014/09/22 (月) 11:11:09 - NM
私も疎水クロマトには脱塩の必要はないと思います。
塩濃度が気になるようでしたら、カラムへの吸着後にNaCl freeのBufferで洗浄すれば良いと思います。
量が多いと脱塩に時間がかかりますし、収量が少ないとロスも気になります。


>[Re:3] ほしさんは書きました :
> いらないと思いますが、ゲル濾過を間に入れたらどうでしょうか。

いらないと思うのに、勧めてる?

(無題) 削除/引用
No.3379-4 - 2014/09/21 (日) 10:18:41 - おお
透析でなくても、塩だけの問題であれば、硫安なり加えれば解決しますよね。

疎水くろまとのあとにイオン交換だと、脱塩かまたは希釈が必要になる場合が多いかと思います。

(無題) 削除/引用
No.3379-3 - 2014/09/20 (土) 15:51:34 - ほし
いらないと思いますが、ゲル濾過を間に入れたらどうでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.3379-2 - 2014/09/15 (月) 09:21:19 - おお
ものがくっつくぐらい十分な塩濃度であればよしです。

透析をおこなっているのは理由は見てみないとわかりませんが、バッファーのpHなどを変えたいとか、イオン交換で溶出した塩濃度でつかないか、つくかどうかわからないため、つくことがわかっている条件にあわせたかったからかもしれません。

脱塩というよりは塩を含めてのバッファー置換ですよね。。。

タンパク質精製ステップ間(IEC→HIC)の脱塩の必要性 削除/引用
No.3379-1 - 2014/09/15 (月) 09:04:17 - わたぼう
イオン交換クロマトグラフィーと疎水性クロマトグラフィーを用いて精製を行うのですが、このステップの間に脱塩操作は必要でしょうか?

イオン交換クロマトの溶出サンプルは高NaCl濃度ですが、これが次の硫安を用いた疎水性クロマトに影響を及ぼすのか否か…




Geヘルスケア様のサイトではイオン交換クロマト後は高塩濃度であるためそのまま疎水性クロマトに供することができると書いてあったり、目的タンパク質と同じ酵素群の精製論文では透析を行ったり、行わなかったりと頭を悩ませております。


みなさんは脱塩をおこなっていますか?

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