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(無題) 削除/引用 No.3360-11 - 2014/09/10 (水) 10:49:08 - flowjoe やったことはありませんが、抗体を導入する方法でもFCSの機種によりますが、どこかに局在しているのであれば、シグナルのareaはなく、heightやwidthで識別できませんかね？

(無題) 削除/引用 No.3360-10 - 2014/09/10 (水) 05:26:19 - ほし ありがとうございます。 実際に使っている論文があまりないのですが、例えばこの論文だと、生きたまま染色FACSできる、というよりは、良い抗体がなくてもRNAプローブで検出できる、という使い方かもしれません。 http://www.nature.com/ni/journal/v15/n4/pdf/ni.2829.pdf プローブはほとんどヒト用なのでマウスはカスタムオーダーなのですね。これから発展していきそうなテクニックかと思いました。

(無題) 削除/引用 No.3360-9 - 2014/09/09 (火) 17:59:42 - そう >[Re:7] RNAさんは書きました : > 生きた細胞のRNAを検出するプローブなら販売されていますけどね。 > https://www.merckmillipore.com/JP/ja/20140428_081057 > カスタムでオーダーもできる。 > > 抗体を使う手段は思いつきません。 こういうのもあるのですね。 これいいですね。 ソーティングにも使えるようですし。

(無題) 削除/引用 No.3360-8 - 2014/09/09 (火) 17:47:41 - mon そうさん、APさん 仰る理論は分かっていますが、局在していたら見た目には判断出来るわけで（細胞あたりの蛍光強度は同じでも）。それを判別出来るアプリがあれば...（2次元ならアプリはあるけど）。ソーティングアプリ次第かも（聞いたことないけど）。 それ以外の細胞を焼き殺すとか。 まあ、昔の抗体導入試薬は試したことがあって結果は散々でしたが。

(無題) 削除/引用 No.3360-7 - 2014/09/09 (火) 17:44:23 - RNA 生きた細胞のRNAを検出するプローブなら販売されていますけどね。 https://www.merckmillipore.com/JP/ja/20140428_081057 カスタムでオーダーもできる。 抗体を使う手段は思いつきません。

(無題) 削除/引用 No.3360-6 - 2014/09/09 (火) 17:26:37 - AP いやいや、そういう系を使うのでは解決にならないでしょう。 標的タンパク質を発現している細胞にも発現していない細胞にも抗体が入るわけでしょう。標的タンパク質と結合した抗体と結合していない抗体が区別できない限り、それを発現している細胞とそうでない細胞を区別することはできませんね。 蛍光顕微鏡で標的オルガネラ膜に局在している細胞を探して拾うとか？ 標的オルガネラ膜を何らかの方法で蛍光標識して抗体の標識とでFRETを検出する？

(無題) 削除/引用 No.3360-5 - 2014/09/09 (火) 17:11:23 - そう >[Re:4] monさんは書きました : > 細胞種にもよるとは思うけど、サンプル依頼してみれば？ > http://protenova.com/ab_carrier_1.html > うまくいったら是非報告してください。 そういう試薬は色々あるのですが、蛍光標識抗体を細胞に入れた場合、目的のタンパク質の発現の有無に関わらず抗体が入った細胞全てが陽性になるので、そのままではソーティングには使えません。 という意味で、コメントしたのですけど。

(無題) 削除/引用 No.3360-4 - 2014/09/09 (火) 16:28:33 - mon 細胞種にもよるとは思うけど、サンプル依頼してみれば？ http://protenova.com/ab_carrier_1.html うまくいったら是非報告してください。

(無題) 削除/引用 No.3360-3 - 2014/09/09 (火) 15:47:47 - そう 基本的に無理です。 普通はレポーター遺伝子を入れてソーティングすることからも、現時点ではよい方法がないからでしょう。 むしろ、考えたら大発見です。 タンパク質を導入する試薬を用いて、抗体を生細胞内に入れる方法はありますが、局在は分かっても発現の有無を判別することはできませんし、導入効率の問題もあります。 抗原と結合したら特異的に蛍光を発するようなシステムを開発しないと難しいでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.3360-2 - 2014/09/09 (火) 14:39:33 - ほし エピトープは細胞質（オルガネラ膜の細胞質側）にあります。

細胞内FACS染色、生細胞 削除/引用 No.3360-1 - 2014/09/09 (火) 14:37:44 - ほし 細胞を生かしたまま、細胞内のタンパク質をFACS用に染色する方法はありますか？ 固定した細胞で細胞内の染色可能な良い抗体を持っていて、ソーティングして培養したいのですが、細胞を生かしたまま染めるいい方法はないものでしょうか。

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