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(無題) 削除/引用 No.3326-3 - 2014/08/29 (金) 01:08:59 - おお terminationのしかたがpol IIIではちがいますから、polyAがつきますかね。。。cording region の途中変なところでterminationが起こったりするかもしれません。 まあやってみてもいいかもしれないけど、発現するとおもってやるというより、興味本位的なかんじでやるというならどうぞ。

(無題) 削除/引用 No.3326-2 - 2014/08/28 (木) 18:59:20 - ええ 転写調節に関して素人なのですけど、発現したいものでPolII系とPolIII系を分けて用いているわけだし、無理じゃないでしょうか。 shRNAの発現ベクターに薬物耐性遺伝子とかあれば、そのプロモーターが使えるだろうし、企業から買うのが高くて躊躇しているなら、理研の遺伝子材料開発室とかAddgeneから入手したり、発現ベクターを構築した研究者から直接分譲してもらえば、0-1万円以内で手に入りますし確実だと思いますけど。

U6プロモーターでタンパク質の強制発現はできますか 削除/引用 No.3326-1 - 2014/08/28 (木) 18:15:08 - S いつも勉強させてもらっています。 動物細胞用のベクターのプロモーターについて教えてください。 現在、動物細胞にあるたんぱく質を強制発現しようと思っています。 ラボにある空ベクターを調べたところ、 U6プロモーター下にMCSがあるshRNA発現用のベクターがありました。 残念ながら、CMVやSV40などの強力なプロモーターを持つベクターはありませんでした。 U6プロモーターは、低分子RNAの発現に向いているということが一般的に知られているようですが、やはりタンパク質の強制発現はあまり期待できないものなのでしょうか。 ちなみに発現させようと思っているたんぱく質は、40kDa程度のものです。 できれば手持ちのベクターで実験ができればと考えていたところで少し心配になり質問させていただきました。 よろしくお願いします。

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