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(無題) 削除/引用 No.3321-5 - 2014/08/28 (木) 11:35:07 - モコ いろりろご返答ありがとうございます。 buffer は共有の作り置きの5×SDS buffer ME(-)に2-MEを9:1(2-MEが1割になるように)混入して作っています。他の人も同じものを使っているのでbufferには問題は無いようです。ﾏｰｶｰもきれいに流れています。とするとsampleの問題(指摘して頂いたように、ｶﾘｳﾑや塩分、非イオン性界面活性剤の濃度がおかしい）でしょうか・・ mammalian cell extractは共有のものなので大丈夫と思います。 sampleに細胞を収穫した際に使ったPBSが混ざっていることは原因になるでしょうか？？教えて下さい。

(無題) 削除/引用 No.3321-4 - 2014/08/27 (水) 23:40:30 - おお ゲルを脱気せずに重合させているなら(最近はAPSなど多めに入れて脱気せずにやるようなぷろとこーるもみるけど)、脱気してから重合させてもいいかもですね。ただ脱気するとおなじ分量のAPSとかではかなり重合速度が早くなりますから、調整しないといけないかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3321-3 - 2014/08/27 (水) 23:36:13 - おお 自作のゲルでしたらゲルのpolymerizationが不完全なのかもしれません。そうでなければゲルが古くなってたのかな。。。ちょっとその辺はプレキャスト使ったことがないのでわかりませんけど。 http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/22295.html

(無題) 削除/引用 No.3321-2 - 2014/08/27 (水) 21:05:39 - 名無し そうですか、フニャフニャですか。電気泳動の段階で問題が起きているのでしょう。ゲル作成方法や使っているアクリルアミド等の試薬、通電条件について、周りの上手くいっている人と一緒にその人のやり方と自分のやり方とよく照合したらどうでしょうか。もしマーカーは普通に流れてるならば、サンプルの問題ですね。一般に2xsample bufferとサンプルを混和して泳動用試料をつくることが多いですが、サンプルの塩濃度がかなり高いとか、非イオン性界面活性剤が許容できる濃度以上に混じってるとか、SDS化や泳動を妨害する成分（例、高濃度のカリウム塩）が多く含まれているとか。

電気泳動バンド　フニャフニャ 削除/引用 No.3321-1 - 2014/08/27 (水) 20:51:24 - モコ western blottingしています。 電気泳動のバンドがフニャフニャと波打つ感じになります。 原因がわかりません。 心あたりがあるかたがいれば教えて下さい。 お願い致します。

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