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(無題) 削除/引用 No.3279-21 - 2014/08/11 (月) 11:49:22 - くろ ごめんなさい、PIと書いたのは間違いで、ethidium homodimerでした・・　これはDNAに結合したときにしか光らないので、入れっぱなしでOKです。おおさんの書かれたとおり、死んだ（死につつある）細胞だけ染めたという意味です。

(無題) 削除/引用 No.3279-20 - 2014/08/07 (木) 11:57:41 - まわしもの >[Re:13] APさんは書きました : > CellTox > ↑ > 原理はHomoethidiumやPI, acridine Orangeなんかと変わらないようだけれどなあ。価格に見合うだけのパフォーマンスがあるのだろうか。 そこですよね。だいたいの場合キット化されていると高くなりますよね。 一応、細胞毒性が低い／無くてlive cell imagingに最適だと謳ってますが、他の色素との比較はないようですし。

(無題) 削除/引用 No.3279-19 - 2014/08/07 (木) 00:32:27 - おお PIは生きた細胞は染まりませんから、入れっぱなしで死んで培地から侵入してくるPIで染まるのをみるということだと思います。

(無題) 削除/引用 No.3279-18 - 2014/08/07 (木) 00:28:22 - おお PI など赤系はphenol redのバックグランドが高いとはいわれていますね。でもPIの蛍光はかなりつよいので一応見えると思いますけど。特に核に濃縮されますので。

(無題) 削除/引用 No.3279-17 - 2014/08/06 (水) 23:42:49 - くろ 何度かCalceinAMとPIをPhenolred無しのDMEMに入れて、1週間くらい経時観察続けたことありますが、死ぬもの、増えるものとはっきり撮れますよ。強烈な蛍光なので、楽な観察でした。

(無題) 削除/引用 No.3279-16 - 2014/08/06 (水) 20:30:47 - iro 確かに色素によっては、培地の自家蛍光で見えにくいものもあるかもしれないですね

(無題) 削除/引用 No.3279-15 - 2014/08/06 (水) 20:25:25 - PolyA ＞＞Calceinだと生細胞が染まって死んでも染まったままだから、この場合使えなさそうです。 ＞もし死細胞に残り続けても、赤にも染まるのだから、Mergeして黄色（および緑が抜けて赤色）の細胞が死細胞、とすれば良いのではないでしょうか。 CalceinAMとPIって入れたまま培養できるんですか。 PI入れたまま培養すればそうなるかもしれませんが、 CalceinAMとPIかけて染まった後、 DMEMなどに変えて培養するのではありませんか？

(無題) 削除/引用 No.3279-14 - 2014/08/06 (水) 19:25:59 - TS ＞Calceinだと生細胞が染まって死んでも染まったままだから、この場合使えなさそうです。 もし死細胞に残り続けても、赤にも染まるのだから、Mergeして黄色（および緑が抜けて赤色）の細胞が死細胞、とすれば良いのではないでしょうか。 かっこいいイメージが取れそうだけど (^_^;

(無題) 削除/引用 No.3279-13 - 2014/08/06 (水) 19:11:48 - AP CellTox ↑ 原理はHomoethidiumやPI, acridine Orangeなんかと変わらないようだけれどなあ。価格に見合うだけのパフォーマンスがあるのだろうか。

(無題) 削除/引用 No.3279-12 - 2014/08/06 (水) 17:50:12 - まわしもの PromegaのCellTox™ Green Dyeは72時間までリアルタイムで測定できるみたいですよ。 Calceinだと生細胞が染まって死んでも染まったままだから、この場合使えなさそうです。

(無題) 削除/引用 No.3279-11 - 2014/08/06 (水) 17:21:39 - TS たぶん個別に安いとこから買えば、6割くらいの金額じゃないかな。

(無題) 削除/引用 No.3279-10 - 2014/08/06 (水) 17:18:10 - TS キット化されているとすれば、これかな。 https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/L3224

(無題) 削除/引用 No.3279-9 - 2014/08/06 (水) 17:09:41 - flowjoe Calcein-AMで生細胞染めて、PI添加培地イメージングでどう？ 複雑な操作は無いよ。

(無題) 削除/引用 No.3279-8 - 2014/08/06 (水) 14:06:15 - Hivit >[Re:5] おおさんは書きました : > http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC96238/ > これが死んだときに色が消えるというのにつかえるみたいですが。 > あとはcell impermeable なdyeを組み合わせれば何とかなりそうな気がしますけどDAPIとかPIとか、最近はもっと種類があるかもしれません。 はい、そういう一般試薬で何とかなりそうな気はしているんですが、 もっと使いやすいものとか、目的のような使用法で実績がある系などが あればなぁと思い質問させていただきました。

(無題) 削除/引用 No.3279-7 - 2014/08/06 (水) 13:59:36 - Hivit >[Re:4] らいさんは書きました : > NIH 3T3 fibroblasts stained with JC-1のタイムラプス画像 これは30min程度のもののようですが、JC-1は１日とかの追跡でも使えるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.3279-6 - 2014/08/06 (水) 13:53:15 - んお 自家蛍光？

(無題) 削除/引用 No.3279-5 - 2014/08/06 (水) 13:53:01 - おお http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC96238/ これが死んだときに色が消えるというのにつかえるみたいですが。 あとはcell impermeable なdyeを組み合わせれば何とかなりそうな気がしますけどDAPIとかPIとか、最近はもっと種類があるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3279-4 - 2014/08/06 (水) 13:52:42 - らい NIH 3T3 fibroblasts stained with JC-1のタイムラプス画像 www.lifetechnologies.com/jp/ja/home/life-science/cell-analysis/flow-cytometry/cell-health-and-viability-assays-for-flow-cytometry/apoptosis-assays-for-flow-cytometry/jc-1-dye-mitochondrial-membrane-potential-probe.html

(無題) 削除/引用 No.3279-3 - 2014/08/06 (水) 11:39:02 - Hivit >[Re:2] APさんは書きました : > JC-1 ? ありがとうございます。 ただ、JC-1はエンドポイントアッセイの試薬ですよね？ 希望のものは２４時間程度リアルタイムとかタイムラプス的に培養を継続しながら イメージングできるものなのです。

(無題) 削除/引用 No.3279-2 - 2014/08/06 (水) 10:40:58 - AP JC-1 ? http://www.funakoshi.co.jp/contents/950

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