皆さんにお力を貸していただきたくトピックを作らせて頂きました。
現在Ｍ２です。
免疫蛍光染色で処理の違う細胞のタンパク量の比較を行いたいと思っております。
細胞数が少なく、Westernはできませんので免染で示したいと思っております。
方法は
・培養細胞群からある細胞集団をソートで分取
・それをサイトスピンでスライドガラスに張り付ける
・免染
sampleは同じ細胞集団ですが、培養時の処理に違いがあります。
この処理の違いによりタンパク量の低下が起きていることを示したいのです。
しかしサイトスピンで張り付ける際別々のスライドガラスに張り付けるため、その後の免染での微妙な条件の違いが出ます。
このため蛍光強度で比較することは難しいと思っております。
蛍光強度で比較するには、インターナルコントロールとして発現量の変わらないタンパクを染めて補正をかければ良いかと思うのですが、すでに二重染色をしていますので、三重染色は難しいと思っています。
現在考えている方法は2つです
@サイトスピンで張り付ける際全く別の細胞を混ぜ、その細胞の蛍光強度で補正をかける
Aサイトスピンで同じスライドガラスに2sampleを張り付ける
（これを実現するFunnelは現在ラボに無し）
皆さんならどのようにしてタンパク量を比較しますでしょうか。
お力をお貸しください。
どうぞよろしくお願い致します。 |
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