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(無題) 削除/引用 No.3245-6 - 2014/07/29 (火) 16:10:09 - 初心者 おお様、ご回答ありがとうございます。再精製してみることにしたいと思います。 hana様、ご回答ありがとうございます。RNAの収量は十分あるので今度から上清のみにすることにします。実験中はRNAが二層に分かれて入っていたら、その差が大事な可能性があるかもしれない、不純物が入ってもその後の遠心で取り除けるだろう、などと思ってしまいました。

(無題) 削除/引用 No.3245-5 - 2014/07/29 (火) 10:16:35 - hana うちの場合はメラニン過多の組織なのでなんとも言えないのですが。 もし見込み収量のRNAが多いのでしたら、そんなに欲張らずに上清のきれいなところだけ使われたほうがいいかと。 吸光度での濃度測定は信用できないし、PCRもかかりにくかったりします。

(無題) 削除/引用 No.3245-4 - 2014/07/29 (火) 07:27:16 - おお >[Re:3] 初心者さんは書きました : > おお様、ありがとうございます。 > なるほどヘモグロビンですか。次からはその濃い色の層はとらないで精製した方が良さそうでしょうか？ 経験がないのでわかりません。一度比較実験をするか、経験のある人のコメントがつけばそれに従った法がいいかと思います。 > > また、これは再精製せずに色素がついたままそのまま使ったらまずいですか？ > これもわかりません。可能性としてあり得ることを書きますと、肝臓ではないですが夾雑物がRTやPCRを阻害する場合もあります。あとUVによる濃度の計算がぶれるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3245-3 - 2014/07/28 (月) 22:07:01 - 初心者 おお様、ありがとうございます。 なるほどヘモグロビンですか。次からはその濃い色の層はとらないで精製した方が良さそうでしょうか？ また、これは再精製せずに色素がついたままそのまま使ったらまずいですか？

(無題) 削除/引用 No.3245-2 - 2014/07/28 (月) 15:21:15 - おお 肝臓の赤いいろはヘモグロビンとかじゃないかな。だから一部蛋白が変性したのが完全にペレットにならずふわふわした状態で下の方にたまってるんじゃないかなぁ。。。 少し多めにtrizolを使ってみるとか、得られたRNAを水や1%ぐらいのSDSなどに溶かしてもう一度TRIZOLで再精製するとか。 ちなみにRNAに色が付いているのはその下の層の色素の持ち込みなのか、違う色素とかなのかは何ともいえませんよね。

肝組織にtrizolを加えてホモジネート後遠心すると２層になる 削除/引用 No.3245-1 - 2014/07/28 (月) 10:48:27 - 初心者 いつもお世話になっております。 肝組織のmRNA抽出のためにtrizolを加えホモジネートした後、一度遠心してから上清にクロロホルムを加えようとしたところ、沈殿物と通常の上清と思われる層の間にやや濃い色の（肝臓の色に近いと思います）層が出てきました。 これは一体何なのでしょうか？ ご教授の程よろしくお願いいたします。 ちなみにその後その濃い色の層も一緒にとり通常通りの抽出をするとクロロホルムを加えた後の水層が若干黄色に着色されてしまい、最終的に抽出されたmRNAも白ではなくやや茶色っぽくなってしまいました。

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