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ハウスキーピング遺伝子 削除/引用 No.3224-6 - 2014/07/18 (金) 15:29:59 - ema マクロファージのハウスキーピング遺伝子は他にもあるのですがβactinが適切であると何で判断したのでしょう？ マクロファージは突起のばすとか動くとかでアクチン重合なりなんなりが非常に起こりやすい細胞であると思うのですが。 生の状態でβactinがばらつきサイトカインのデータはばらつかないものが出ているなら系を再考した方が良いかと思います。

(無題) 削除/引用 No.3224-5 - 2014/07/18 (金) 13:24:09 - 7744 私もチオPECからRNAを回収してqPCRをかけていますが、どんなにばらついても１サイクル以内には収まります。 PECだからばらつくということではないはずです。 もしあつさんが他のサンプルのqPCRではばらつきなくできているのであれば、原因はおそらくサンプルでしょう。 今出ている情報からはそれぐらいしかわからないですね。

(無題) 削除/引用 No.3224-4 - 2014/07/18 (金) 12:48:13 - おお 分解か取れてないか、、、がまず疑われますが、収量はどうでしょうか。 そうでなければ何か精製の過程で試薬のcarry overとかでRTの反応がうまくいかないとか。

(無題) 削除/引用 No.3224-3 - 2014/07/18 (金) 12:02:44 - あつ おお様 n=4でり行っているのですが、同じ群のなかでも５〜８倍ぐらいばらついたり、群どうしにも偏りが生じることがあります。 試薬をかけて、すみやかにRNA抽出液をかけて、できるだけRNAが分解されないような方法をとっているつもりなのですが、分解されているかされていないかどうか、はっきりとはわからない状況です。すみません。

(無題) 削除/引用 No.3224-2 - 2014/07/18 (金) 11:25:10 - おお どの程度ばらついていますか。RNAは分解とかなくちゃんと取れてますか。

腹腔マクロファージにおけるリアルタイムPCRでの値のばらつき 削除/引用 No.3224-1 - 2014/07/18 (金) 11:01:43 - あつ はじめて質問させていただきます。 数匹のマウスから採集した腹腔マクロファージに試薬を投与し、リアルタイムPCRで炎症性サイトカインの増減を調べています。 その時、ハウスキーピング遺伝子として使用しているB-actinの値がどうしてもばらついてしまい、困っています。 そのばらつきを抑えるために、数匹のマウスから採集した腹腔マクロファージを混ぜて使用したり、TGC培地による誘導をなくしてみたものの、改善されませんでした。 どうすればそのばらつきを抑えることができるでしょうか？ どうぞよろしくお願いいたします。

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