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感謝 削除/引用 No.3211-7 - 2014/07/12 (土) 03:04:59 - Gachapin いろいろなご意見ありがとうございました。 参考にさせていただきます。

(無題) 削除/引用 No.3211-6 - 2014/07/11 (金) 22:23:06 - 名無し 市販の抗体もいろいろだからね。BSAとかのキャリア蛋白質いれてるのとそうでないやつとか、抗体の精製度(抗原でaffinity-purifiedしてるものか、IgG画分までか、とか抗血清のままかとか。高度に精製されててきょう雑物が少ないと長期的には不安定かもね。それなりに不純なほうがタフだったりする）とか、抗体濃度（濃度薄ければ、器壁に吸着してLossが起きたり不安定とかかも）でかなりちがうかも。タフな抗体だと４C保存の2年ものでも今も余裕で使えてるし、真夏に一晩中室温放置したときも特にダメージなしのものもある。一方、最初はかなりいい感じだったけど数ヶ月後〜半年後には完全終了した抗体もそれなりの数ある。なお抗体の失活はあるときを境に急激に来る事が多い気がする。残念だけど抗体は一度調子悪くなったら、実験条件を変えたりしても根本的な解決はできないので、早いこと買い直した方がいいとおもう。購入に際しては、抗体はモニーターとかキャンペーンとかがよくあるから、そういうのををうまく利用すればいいとおもう。

(無題) 削除/引用 No.3211-5 - 2014/07/11 (金) 14:48:30 - ほし FACSで使う抗体とか４C保存で数年前のものでも全然平気ですよ。 凍結溶解さえ繰り返さなければ、相当長持ちすると思いますよ

(無題) 削除/引用 No.3211-4 - 2014/07/11 (金) 08:08:53 - Gachapin おお　さん ありがとうございます なかなか　新しい抗体を買うのもいいだしにくく 迷っておりました

(無題) 削除/引用 No.3211-3 - 2014/07/11 (金) 07:20:30 - おお その抗体が昔同じような系でワークしていたのであれば、何らかの理由で悪くなってるかもしれません。もともとワークしなかったため、使わずずっと保存されていたのかもしれません。今使っている試料でその蛋白の発現が弱く検出できないのかもしれません。 妥当とおもうポジコンででないのなら、現時点でワークすると思えるものを手に入れるしかないのでは。 >また、Chemiluminescent substrateについて、やはり感度のいいFemtoまで拾ってくれるもののほうがいいのでしょうか。 それは何ともいえませんけど、、、抗体が悪くなってきているのを無理矢理感度をあげるというのなら、それはどうかと、、、 まあでればそれはそれでよしかもしれませんけど、3回目あたりからさらに抗体が悪くなってきてバンドが検出できないとか、、、そんなことも考えた方がいいかもよ。

(無題) 削除/引用 No.3211-2 - 2014/07/11 (金) 06:15:53 - TK-1 一般に抗体はそんなに壊れるもんではない。ましてやマイナス２０度にキッチリとおいてあるのなら普通は問題ないし、１年くらいなら４度においてあっても大丈夫なことが多い。 新しいか古いかの問題より、使えない抗体はおいておいてもしょうがない。

古い抗体たち 削除/引用 No.3211-1 - 2014/07/11 (金) 04:07:43 - Gachapin いつも参考にさせていただいております。 １年近くWESTERNがされていなかったラボにきて、一からWBをしております。新しい抗体ではうまくいくことが多いのですが、冷蔵庫-20度の中にあったものでも古いものはうまくいかないのですが。 買いなおしたほうがいいのかどうか。 本当にこまっています。 特定の抗体にはやはり限度があるのでしょうか。 また、Chemiluminescent substrateについて、やはり感度のいいFemtoまで拾ってくれるもののほうがいいのでしょうか。 おしえていただければ幸いです。

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