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(無題) 削除/引用 No.3189-7 - 2014/07/06 (日) 15:24:12 - おお >[Re:6] mikaさんは書きました : > いわゆるリバース法にてトランスフェクションしてみるとか？？ reverse transfectionですか。やったことないんですよね。気に留めておきます。たしかにそっちの方がうまくいけばいいような気がします。 >[Re:5] みさんは書きました : > 細胞染色とか個々の細胞形態を観察したい時などは20-30％コンフルでまいて、 そうですよね。growth考えると1/4コンフルぐらいがやりやすいですよね。

(無題) 削除/引用 No.3189-6 - 2014/07/04 (金) 13:47:20 - mika いわゆるリバース法にてトランスフェクションしてみるとか？？ ちょっと、ずれてますが、プロトコールと言えばlipofectamineの添付プロトコールがDNAと試薬混合後5分になってて、あれっ？て思いました。前って20分とかでしたよね？？

(無題) 削除/引用 No.3189-5 - 2014/07/04 (金) 12:51:34 - み 細胞染色とか個々の細胞形態を観察したい時などは20-30％コンフルでまいて、次の日にDNAとtransfection試薬を通常より少なめに使用して導入したりします。 導入効率をそれほど求めない場合や細胞密度が低い場合は試薬を少なくした方が毒性低いですから。。。

(無題) 削除/引用 No.3189-4 - 2014/07/04 (金) 12:35:46 - おお みなさんありがとうございます。やはり多いですよね。。。実際まきなおしてからにしようかと思うことがよくあります。でもちょっとていこうがあるんですよね、、、

(無題) 削除/引用 No.3189-3 - 2014/07/04 (金) 05:23:31 - L この２年ほど、HEK293Tでは自作のPEIしか使ってませんが、サブコンフルエントでトランスフェクションしてます。Protein biochemistryやウイルスベクター産生が目的の場合はトランスフェクション後培地を変えて、そのまま24-48時間培養してますが、細胞はオーバーコンフルエントで培地は黄色になってます。Cell biologyが目的の場合はトランスフェクション終了時にまき直してます。

(無題) 削除/引用 No.3189-2 - 2014/07/04 (金) 04:53:21 - 中西部ポスドク 私はレンチウイルス作成目的でlipofectamine2000を使って遺伝子導入する際、HEK293Tを600Kー700k/6wellで播きます。 次の日の見た目で70％コンフルエントぐらいでしょうか。それでも48時間後には完全なコンフルエントになってメディウムも黄色くなることがありますので、少し多いように思っています。 ただ、細胞を減らし過ぎると明らかに毒性が出て生存率が下がるので、そのままで使っていますが、、、。

HEK293などのtransfection 削除/引用 No.3189-1 - 2014/07/03 (木) 23:12:13 - おお ヒトや哺乳動物の細胞につかうtransfection試薬ですが、最近の商品のinstructionには80%コンフルとかで導入するとか比較的高いcell density を提示しているものがおおいようなきがします。 みなさんはそれによって今までのtransfection protocolを見直したとかありますか。高密度では実験やりにくくないですか。

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