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(無題) 削除/引用 No.3141-5 - 2014/06/21 (土) 22:24:45 - 名無し その60Kが仮にアルブミンだとしての話なわけだが、HEKって胎児腎臓由来の細胞でしょ。もし尿細管上皮細胞とかの性質があれば、アルブミン（この場合はBSAなわけだが）とか積極的に取り込んでることもあり得るかも、てか、実際、アルブミンを取り込む受容体は腎臓にあるよ（詳しくはググってください）。HEK細胞に発現してるかどうかはわかんないけど、興味あれば抗体買ってWBで調べてみたらどうかな。特に、ある条件ではその60Kバンドがきれいに消えたとかいうのとつながれば面白い展開になる予感するし。

(無題) 削除/引用 No.3141-4 - 2014/06/21 (土) 14:03:53 - おお BSAかもですね。くっきりしたバンドなのでアバンダントでよく知られた細胞内の蛋白かもとおもったので。。。偶然ですがあるコンディションでくっきりとなくなっていましたので(培養は両方とも10%FCSベースです)。 まあちょっと2Dのデーターベースでも覗けばいいだけのことでわあるとおもいますが。

(無題) 削除/引用 No.3141-3 - 2014/06/21 (土) 13:18:20 - ~ 培地が血清入りであれば、まずはBSAを疑っていいのでは。 PBSで数回洗って、無血清培地に変えてO/Nインキュベートしても、ばっちり残ってることがあります。

(無題) 削除/引用 No.3141-2 - 2014/06/21 (土) 08:55:43 - おお >[Re:1] おおさんは書きました : > ヒト培養細胞(実際今使っているのはHEK)でtotal lysate をSDSPAGEに流したとき60-66kDaに太いしっかりしたバンドが見えますが、なにか心当たりある蛋白はありますでしょうか。 染色は膜転写後, ponceauS です。ゲルをそのままCBBなどで染めても結果はほぼ同じと思われますが、、、

60 kDa in human cells 削除/引用 No.3141-1 - 2014/06/21 (土) 08:49:26 - おお ヒト培養細胞(実際今使っているのはHEK)でtotal lysate をSDSPAGEに流したとき60-66kDaに太いしっかりしたバンドが見えますが、なにか心当たりある蛋白はありますでしょうか。 実験した人はちょっとごちゃごちゃにしているのでうまく条件を提示できませんが、RIPA(1%NP-40 1%DOC without SDS)でlysisしているか、それ相当のものという感じです。 んBSA持ち込んでるかな。。。

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