全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.3132-5 - 2014/06/17 (火) 23:06:25 - しんじ みなさまありがとうございます。 LCMを行う施設が、私のラボから少し距離があるため少しでもRNAの分解が抑えられればと思いご相談させていただきました。 皆様のご意見参考にさせていただきます。

(無題) 削除/引用 No.3132-4 - 2014/06/17 (火) 14:14:31 - AA RNLaterに直接回収して、そのまま−80℃で数週間は安定だと、 Leicaの技術のヒトに言われたことがあります。 次の精製のステップがRNeasyみたいなカラムであれば、 RNlaterで保存しておくのが良いのではないでしょうか？

RNAlaterでなければだめですか？ 削除/引用 No.3132-3 - 2014/06/17 (火) 13:44:15 - ema 目的が ＞凍結切片からレーザーマイクロダイジェスチョン(LCM)を行い、RT-PCRを行う予定です。 ならRNAlaterでなくRNA回収用のPhenol系のIsogen等、もしくはカラムキットのLusisBufferに直接入れて-80℃凍結ではだめなのでしょうか？ 切片になって十分に薄いので試薬の浸透も十分でRNAが壊れるならその前の処理での可能性が大きいような。 RNAlaterステップををかませると後でWashしないと塩があり過ぎとか、Wash工程でサンプル少量なのでロスしても見えないし怖いので。

(無題) 削除/引用 No.3132-2 - 2014/06/17 (火) 12:58:04 - bluehornet LCMは行ったことがないので参考になるかはわかりませんが・・・。 RNAlaterもRNAlater-iceも、組織から脱水する事によってRNaseを働かなくすることが目的の試薬です。MSDSを見ればわかりますが、RNAlaterの主成分は硫酸アンモニウムで、濃度が高く比重も高くなっています。RNAlater-iceは主成分がエタノールでそれほど比重も高くありません。 LCMで採取した組織ということでかなり小さいでしょうから、RNAlaterでもRNAlater-iceでも瞬時に脱水されると思います。ですがRNAlaterだと後で遠心分離等を行うときに比重が高く扱いにくいと思うので、RNAlater-iceの方が適してるんじゃないでしょうか？ 便乗質問で申し訳ありませんが、どなたかRNAlater-iceと同等な試薬を自作した人がいましたらレシピ等教えてもらえないでしょうか？ エタノール、DMSO、適当なバッファーを混ぜれば作れそうな気がするのですが・・・。

RNAlaterについて 削除/引用 No.3132-1 - 2014/06/17 (火) 08:42:13 - しんじ 実験素人ですが、よろしくお願いします。 凍結切片からレーザーマイクロダイジェスチョン(LCM)を行い、RT-PCRを行う予定です。 LCMで採取できた組織はRNAlaterで保存することは可能でしょうか。 もし可能であれば、新鮮組織用のRNAlaterを用いるべきなのか、凍結組織用のRNAlaterを用いるべきなのか教えていただけますでしょくか。

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---