全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.3101-3 - 2014/06/09 (月) 11:10:14 - mon Fさん、レスありがとうございます。 私の書き方が悪かったのですが、標的配列20bpの5'端がGGでない場合、 5'GG-(標的18bp)-PAMで良いのでしょうか。 それとも5'GG-(標的20bp)-PAMで良いのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3101-2 - 2014/06/09 (月) 08:01:21 - F 経験上、特に問題ないです。 T7とかT3プロモーターは転写開始点がGGであることが転写効率に影響するということで、GGの3'側に標的配列（w/o PAM）を更かしたものを使っていますが、RNA注入によるKOマウス作製で特に問題が起こったことはないです。

CRISPR-gRNAの5'付加配列 削除/引用 No.3101-1 - 2014/06/05 (木) 10:58:26 - CRISPR CRISPR-Cas9システムのgRNAの設計について以下の質問があります。 T7 promoter部位に組み込むタイプのベクターを利用する予定です。その際制限酵素部位の切断パターン(BsaI)からどうしても転写開始点から"GG"が余分に付加されます。これはCRISPR-Cas9機能に問題無いのでしょうか。 他のgRNA発現ベクターの情報では、一塩基Gの付加すなわち5'-G-X20....は問題無いようです。 GG-X20-NGGとなる標的配列がないため、どうしても余分な５’端にGGが付加されたgRNAになります。 これが機能に問題ありならベクターを改変しますが、教えていただけると幸いです。

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---