Bio Technical フォーラム

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RNA抽出、吸光度について トピック削除
No.3089-TOPIC - 2014/05/31 (土) 15:11:36 - iiii
RNA抽出後、RNAの濃度測定と純度測定を行ったのですが、A260/A280の値が、2.0付近には収まらず、0.5や5.5といった値を示しました。これはどういったことが原因で起こったのかが理解できません。また、ある組織一つにつき、RNA濃度が1μg/個といった情報がある中で、ある組織一つで抽出を行った結果、4μg/個となってしまいまいした。このときのA260/A280は、1.3となっています。何故でしょうか。ご回答よろしくお願いします。
 
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No.3089-4 - 2014/06/01 (日) 13:19:21 - mi1
残念ながら、RNAの抽出や紫外吸光、吸光光度計への理解不足で、ここでまともな質問することも困難とお見受けします。
まずは、UVスペクトルを近くの先達に見てもらうこと、抽出の手順をチェックしてもらうこと、とりあえずRNAの実験書を前の方だけでも通読することをお勧めします。

(無題) 削除/引用
No.3089-3 - 2014/06/01 (日) 11:38:13 - mbb
A260/A280の値が低くなる原因としては、RNase等による
RNAの損失やタンパクの混入などが考えられるかとおもい
ますが、0.5や5.5などばらつきが多いのであれば、元の
RNA溶液の濃度が低く検出限界以下でノイズを拾ってるの
ではないでしょうか?逆に濃度が高すぎる場合も考え
られるかと思いますので、その辺のチェックをしてみたら
いかがでしょう?

(無題) 削除/引用
No.3089-2 - 2014/05/31 (土) 18:51:55 - AP
有り体に言えば、うまくいっていない(手が悪い)んでしょう。

>これはどういったことが原因で起こったのかが理解できません。
やった本人がわからないことがネット上の第三者にわかるわけがない。
せめて、どういう材料から、どういう手法で精製して、どのように測定して、その測定がこうだったと、丁寧に説明しないと。質問が雑すぎる。

RNA抽出、吸光度について 削除/引用
No.3089-1 - 2014/05/31 (土) 15:11:36 - iiii
RNA抽出後、RNAの濃度測定と純度測定を行ったのですが、A260/A280の値が、2.0付近には収まらず、0.5や5.5といった値を示しました。これはどういったことが原因で起こったのかが理解できません。また、ある組織一つにつき、RNA濃度が1μg/個といった情報がある中で、ある組織一つで抽出を行った結果、4μg/個となってしまいまいした。このときのA260/A280は、1.3となっています。何故でしょうか。ご回答よろしくお願いします。

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