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(無題) 削除/引用 No.3070-5 - 2014/05/27 (火) 20:17:38 - コネコ すみません、思い当たることがありました。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3070-4 - 2014/05/27 (火) 17:33:11 - ~ まずは、どこを潰していて、どこを増やしていて、 現時点で何をご自身で確認できているのかを確認されては？ その情報なしにPCRで増えると書かれても、 問題が起きているのかが分かりません。 ・WT,KOの双方でPCRで同じサイズに増えるようにプライマーやKOがデザインされている ・サンプルがコンタミしている ・Neoカセットが違うところに入っている あたりが生じていても、書かれている現象は見られると思います。

(無題) 削除/引用 No.3070-3 - 2014/05/27 (火) 17:28:29 - コネコ いいえ、まだしてないです。 するべきですね（汗）

(無題) 削除/引用 No.3070-2 - 2014/05/27 (火) 17:26:07 - pp PCR産物のシークエンスは確認しました？

ホモKOなのにリアルタイムPCRで増幅される 削除/引用 No.3070-1 - 2014/05/27 (火) 16:52:51 - コネコ リアルタイムPCRで困っているので相談させて下さい。 他ラボからノンコーディングRNAに関する遺伝子のホモKOマウスを２ライン頂きました。 それらのマウスからES細胞を樹立して、その遺伝子がリアルタイムPCRで増幅されないか確認したところ、なぜか２ラインとも増幅されてしまいました。 リアルタイムPCR後に泳動して確認しても、WTと同様なサイズのバンドがあらわれ、Ct値もWTと変わりませんでした。 その遺伝子はNeoで潰しているのですが、樹立したKO ES細胞がホモにNeoでちゃんと置き換わっていることをPCRで確認できました。 目的の遺伝子が細胞内に存在しないはずなのに、リアルタイムで増幅されるのが不思議でなりません。 ホモKOでもリアルタイムで増幅されることってありえることなんでしょうか？

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