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(無題) 削除/引用 No.307-3 - 2012/03/18 (日) 14:05:15 - み Jurkatにはelectroporationで導入し、westernで7-8割減が確認できます。 単に導入方法の問題でしょう。

(無題) 削除/引用 No.307-2 - 2012/03/17 (土) 19:22:13 - 月詠 そういう技術情報は、製造元（invitogen社）に問い合わせた方がいいと思います。 トランスフェクション自体はうまくいっているのでしょうか？ Jurkat細胞についてはわかりませんが、RAW264やJ774等のマクロファージ系細胞は食作用が強いので、 （RNAiに限らず）一般に通常のトランスフェクション試薬よりもAmaxaのような電気穿孔法を用いた方が効率がよい印象があります。

Jurkat細胞にStelath RNAiが効かない気がします。 削除/引用 No.307-1 - 2012/03/17 (土) 18:32:47 - jurkat 初めまして。さっそくですが、質問させていただきます。 Jurkat細胞にStelath RNAi （Invitrogen）を使用してAktの発現抑制を試みているのですが、どうにもうまくいきません。 使用しているtransfection試薬はLipofectamine RNAiMaxです。 RNAiMax、Stealth RNAiの量を振ったり、transfectionしてから培養する時間を24~72時間の間で振ってみたりしているのですが、ウェスタンの結果を見る限り発現の抑制が全く見られません。 購入したStealth RNAIが使用できる事を293T細胞を用いて確認しています。 ちなみに、Transfection試薬をLipofectamine LTXに換えてみたりもしましたが、発現抑制できていませんでした。 Neon(Invitrogen)やAmaxa(Lonza)のようなエレクトロポレーションのシステムを使わないとJurkat細胞では無理なのでしょうか。 実際、Neonの実績導入の例としてJurkat細胞があげられていますし…。 Jurkat細胞にStealth RNAiを使用した事がある方は、どんな情報でもかまいませんので、教えてくれませんでしょうか。 よろしくお願い致します。

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