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(無題) 削除/引用 No.3038-8 - 2014/05/16 (金) 11:33:47 - L それぞれのデータシートで用いられている蛋白の由来（リコンビナント蛋白なのか、過剰発現細胞のLysateなのか、内在性の蛋白なのか。リコンビナントならばどのような方法を用いて発現精製されたものか。内在性であればどうのような細胞から抽出されたものか。等）に違いが無いか確認済みでしょうか？　 もし同じ条件で調整された蛋白を用いたブロットでデータシートにより分子量に差がある場合は、データシートに一緒についてるネガコンのブロットとの比較で判断してはどうでしょう？　内在性蛋白でノックダウンによるネガコンがついてるものが良いように思います（あまりないかもしれないけど）。分子量だけなら、その蛋白が発現していない哺乳類細胞に全長タグなしで過剰発現して抽出した蛋白のブロットをのせてるデータシートをまずは参考にしてみてはどうでしょう？　 もちろん、文献を当たってみるのも大事ですけどね。

(無題) 削除/引用 No.3038-7 - 2014/05/16 (金) 05:36:45 - mon あるメーカーのある特定の抗体はpeptideを免疫して作製されていましたが、HPに記載されているウェスタン像のバンドの示すタンパクサイズが全く違い全く別の（モノは不明）タンパクを検出していると思えました。 おおさんの仰るようにいろいろ原因がありますので確定ではないですけど。 やはり論文等で使用実績のあるものが良いですよ。ない場合は強制発現実験等で確認した方が後々安心です。もっとも感度（親和性）の問題だと思うのですが内在の目的タンパクを検出できないこともあります。クレームを付けると代替品を送ってくれることも多いですが、そのたびに確かめるのも面倒です。

(無題) 削除/引用 No.3038-5 - 2014/05/15 (木) 14:32:49 - おお 実は分子量が違うというのはいろいろ考えられる理由がありすぎて回答しにくいんです。 もしその抗体をつくった抗原がわかれば、あいそフォームについては解決するかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3038-4 - 2014/05/15 (木) 14:15:31 - こ 同じタンパク質でも、糖鎖修飾の違い等で、由来する細胞が異なれば移動度が異なる事はあります。 実際、データシートでも複数の細胞のサンプルで移動度が違う結果を載せているのもあります。 ですが、ある特異的なバリアントを認識する抗体でなければ、同じ細胞由来のタンパク質なのに、抗体によって検出される分子量が違う事はないでしょう。 何をもって分子量が違うと思ったのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.3038-3 - 2014/05/15 (木) 13:51:48 - おお あなたの示したいような内容の実験でよく使われている抗体を買った方がいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.3038-2 - 2014/05/15 (木) 12:58:44 - Harmonia たとえばGoogle Scholar で検索して、同じ型番を使っている論文を探すとか。

抗体による分子量の違いについて 削除/引用 No.3038-1 - 2014/05/15 (木) 10:45:04 - antibody 各メーカーから様々な抗体が売られていますが、私が見たいと思うタンパクに対する抗体のデータシートを比較すると、検出されるバンドの分子量が結構違うことに気付きました。 こういった場合、何を信用して購入を決断するのが良いのでしょうか？

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